Новые разработки лада: LADA Concept, новинки — Официальный сайт LADA

Содержание

АВТОВАЗ зарегистрировал названия для будущих моделей LADA

АВТОВАЗ зарегистрировал три новых торговых наименования для будущих моделей LADA — Tensa, Forta и Kayna. Названия оформлены как в связке с маркой LADA, так и по отдельности, сообщает «Российская газета». Они зарегистрированы по товарным категориям «автомобили» и «игрушки», следует из базы Роспатента.

Зарегистрировал ли АВТОВАЗ названия «про запас» или компания действительно планирует выпустить новые модели под этими именами — пока неизвестно. Пресс-служба АВТОВАЗа не комментирует эту тему.

Как сообщалось ранее, АВТОВАЗ ведет разработку нового поколения внедорожника LADA 4×4 NG, серийное производство которого начнется не ранее 2022 года. Кроме того, АВТОВАЗ работает над рестайлингом семейства LADA Largus, дизайн которого будет выполнен в фирменном X-стиле. Изменений в технической части модели не планируется. Производство обновленного LADA Largus должно начаться не ранее 2021 года. Также АВТОВАЗ рассматривает возможность расширения коммерческой линейки LADA, в том числе за счет нового фургона под рабочим названием LADA Van. Предположительно речь идет о перелицованном исполнении «каблучка» Renault Dokker.

Как ранее сообщал «АВТОСТАТ», по итогам первого квартала 2020 года российские дилеры LADA продали 79600 машины, что на 3% ниже показателя годичной давности. В результате рыночная доля LADA с начала года составила 20,0% против 21,0% годом ранее, согласно данным АЕБ. Бестселлером АВТОВАЗа в январе-марте стала LADA Granta, чья реализация выросла на 4% и составила 29660 автомобилей. Второй результат показала LADA Vesta – 26785 проданных машин (-4%). На третьем месте по популярности среди моделей LADA идет универсал LADA Largus, на котором остановили свой выбор 8884 покупателя (-6%). Далее следует внедорожник LADA 4×4, разошедшийся тиражом 6651 экземпляр (-14%). Реализация модели LADA XRAY составила 5170 штук (-20%).

Какие модели можно точно ждать на российском рынке в 2020 году – смотрите в «Календаре новинок».

АвтоВАЗ обнародовал основные направления развития моделей — ДРАЙВ

По данным Ассоциации европейского бизнеса, в январе — апреле 2020 года доля российского рынка легковушек и лёгкого комтранса для Лады составила 21,4%, на процент ниже, чем в 2019-м. Но в это число не входят Нивы, которые вскоре поменяют шильдик с Chevrolet на Ладу. А их доля на рынке — 1,1%.

Компания АвтоВАЗ заявила, что в деле внедрения перспективных технологий выбирает путь «сначала конкурентоспособная основа (сам автомобиль), потом дополнительные привлекательные функции». Такой подход противопоставлен пути некоторых производителей, ставящих модные высокотехнологические «фишки» во главу угла, а саму легковушку создающие уже как «довесок» к ним. Что касается машин, то на период 2020-2022 гг. компания наметила выход пяти новых моделей (для них придумано несколько потенциальных имён) и проведение двух фейслифтингов, а на 2023-2026 годы запланированы пять новых машин и пять обновлений. Естественно, лучшие дизайн, комфорт, функциональность являются первоочередными задачами при их разработке.

Об основных достижениях АвтоВАЗа и направлениях эволюции моделей подробно рассказал директор программы Lada B/C Алексей Лихачёв.

Среди высокотехнологичных систем обещаны развитие темы подключённых автомобилей, связи машины и смартфона (удалённое управление функциями), а также внедрение цифровых сервисов (связь автомобиля с удалёнными облачными хранилищами данных).

Для тех, кого «железо» интересует больше, чем цифровые технологии, АвтоВАЗ готовит подарки в виде полного привода на легковых моделях и моторов с более высокой эффективностью. В этом вазовцам поможет кооперация с коллегами по альянсу Renault-Nissan-Mitsubishi. В долгосрочной перспективе: продвинутые помощники водителя (ADAS) с функцией автономного движения, опять же, с применением наработок альянса.

Мелкосерийный универсал EL Lada (2012–2013 год) обладал электромотором мощностью 81 л.с., батареей на 23 кВт•ч и запасом хода 150 км в комбинированном цикле.

Электрокары АвтоВАЗ не забыл. Но пока такая модель получается слишком дорогой для марки, считают на заводе, да и зарядная инфраструктура у нас развита слабо. Тем не менее компания готова рассмотреть вопрос об электрокаре «на перспективу», особенно когда появится ощутимый спрос. При этом АвтоВАЗ не будет разрабатывать соответствующие технические решения самостоятельно, а позаимствует уже существующие у альянса Renault-Nissan-Mitsubishi.

АвтоВАЗ в 2021 году выпустит четыре новые модели Lada

В 2021 году АвтоВАЗ планирует вывести на рынок четыре новинки. По данным портала pokatim.ru, ими станут: новая Lada Granta, спорт-универсал Lada Vesta SW Sport, модернизированные Vesta и Largus.

актуальная LADA Granta

Так, по информации источника LADA Granta нового поколения выйдет в III–IV квартале 2021 года. АвтоВАЗ начал разработку этой модели ещё в 2017 году. Недавно в интернет просочилась информация, что Granta нового поколения построят на платформе CMF-B-LS, а по габаритам она будет больше актуальной модели. Также стало известно, что 3D-макет внешности будущей новинки уже существует, а в разработке проекта принимают участие в том числе инженеры из Румынии и Франции.

независимый рендер рестайлинговой Lada Vesta от mail.ru

Также в следующем году покажут рестайлинговую

LADA Vesta FL, более точные сроки не уточняются. Первая информация о предстоящем рестайлинге флагманской модели LADA появилась весной 2020 года. Так, стало известно, что Vesta FL порадует новыми бамперами, капотом, крыльями и видоизменённой задней частью кузова. При этом появится светодиодная оптика.

прототип LADA Vesta SW Sport во время дорожных испытаний

Кроме того, в 2021 году должны представить LADA Vesta SW Sport. Прототип этой модели уже не раз попадал в объектив шпионских фотокамер во время прохождения дорожных испытаний. АвтоВАЗ планировал наладить сборку новинки по 1–2 штук в неделю весной 2020 года, однако из-за пандемии коронавирусной инфекции сроки пришлось скорректировать. Теперь же выход спортивного автомобиля запланирован на 2021 год.

прототип LADA Largus FL во время дорожный испытаний

Наконец, последняя и, наверное, самая близкая по срокам новинка — это LADA Largus FL. Модель должна дебютировать в первом квартале следующего года. Автомобиль будет выполнен в фирменном Х-стиле марки LADA, но при этом останется в том же ценовом сегменте. Из изменений внешности стоит ожидать новые бамперы, крышку капота, крылья и фары. Задняя часть LADA Largus FL останется без изменений.

АвтоВАЗ — новости и информация о компании

Сетевое издание «Ведомости» (Vedomosti) зарегистрировано в Федеральной службе по надзору в сфере связи, информационных технологий и массовых коммуникаций (Роскомнадзор) 27 ноября 2020 г. Свидетельство о регистрации ЭЛ № ФС 77-79546.

Учредитель: АО «Бизнес Ньюс Медиа»

Главный редактор: Шмаров Андрей Игоревич

Рекламно-информационное приложение к газете «Ведомости». Зарегистрировано Федеральной службой по надзору в сфере связи, информационных технологий и массовых коммуникаций (Роскомнадзор) за номером ПИ № ФС 77 – 77720 от 17 января 2020 г.

Любое использование материалов допускается только при соблюдении правил перепечатки и при наличии гиперссылки на vedomosti. ru

Новости, аналитика, прогнозы и другие материалы, представленные на данном сайте, не являются офертой или рекомендацией к покупке или продаже каких-либо активов.

Сайт использует IP адреса, cookie и данные геолокации Пользователей сайта, условия использования содержатся в Политике по защите персональных данных

Все права защищены © АО Бизнес Ньюс Медиа, 1999—2021

Любое использование материалов допускается только при соблюдении правил перепечатки и при наличии гиперссылки на vedomosti.ru

Новости, аналитика, прогнозы и другие материалы, представленные на данном сайте, не являются офертой или рекомендацией к покупке или продаже каких-либо активов.

Все права защищены © АО Бизнес Ньюс Медиа, 1999—2021

Сетевое издание «Ведомости» (Vedomosti) зарегистрировано в Федеральной службе по надзору в сфере связи, информационных технологий и массовых коммуникаций (Роскомнадзор) 27 ноября 2020 г. Свидетельство о регистрации ЭЛ № ФС 77-79546.

Учредитель: АО «Бизнес Ньюс Медиа»

Главный редактор: Шмаров Андрей Игоревич

Рекламно-информационное приложение к газете «Ведомости». Зарегистрировано Федеральной службой по надзору в сфере связи, информационных технологий и массовых коммуникаций (Роскомнадзор) за номером ПИ № ФС 77 – 77720 от 17 января 2020 г.

Сайт использует IP адреса, cookie и данные геолокации Пользователей сайта, условия использования содержатся в Политике по защите персональных данных

Революция на АвтоВАЗе: новые «Лады» станут клонами иномарок

Автоконцерн Renault, контролирующий тольяттинский автогигант, представил свой новый стратегический план под названием «Ренолюция». Впредь все новые автомобили Lada перейдут на одну платформу с румынской Dacia, а нынешние модели со временем будут сняты с производства.

АвтоВАЗ, который мы по привычке считаем отечественным производителем, на самом деле уже давно стал частью мирового автопрома. Сегодня тольяттинский автогигант выпускает не только иномарки (Renault Logan и Sandero, а ранее — Nissan и Datsun), но и комплектующие, которые поставляются на зарубежные заводы Renault. Более того, некоторые модели Lada — универсал Largus и хэтчбек Xray — созданы на иностранной платформе и, по сути, представляют собой перелицованные версии Dacia Logan MPV и Sandero. И вот теперь в развитии российского предприятия наступает новый этап.

В структуре Группы Renault, куда входит и АвтоВАЗ, Lada объединена с румынской Dacia в одно бизнес-подразделение, что призвано укрепить производственные синергии между брендами за счет использования высококонкурентной по стоимости и гибкой платформы CMF-B в сочетании с высоким уровнем локализации. АвтоВАЗ и Dacia вместе будут выпускать ежегодно более 1 млн автомобилей на базе CMF-B, перейдя к 2025 году с четырех платформ на одну и сократив количество типов кузовов с 18-ти до 11-ти.

По словам генерального директора сети автосалонов Fresh Auto Дениса Мигаля, на сегодняшний день автомобили Lada выпускаются на четырех платформах: B0, Granta, Vesta и 4×4, что значительно увеличивает нагрузку на производство и повышает его стоимость. Переход на единую платформу CMF-B и уменьшение типов кузова до 11 вариаций значительно сократит издержки и позволит расширить объемы выпуска. Однако это негативно отразится на деятельности АвтоВАЗа, так как фактически сотрудникам отечественного предприятия останется только адаптация автомобилей к российским условиям.

— Потеряв свое оригинальное шасси, автомобили Lada станут практически копиями других моделей концерна Renault, кроме того, сравняются с иномарками по цене. Разумеется, это не прибавит им конкурентоспособности и, как следствие, объема продаж. Более того, с унификацией платформы Россия теряет свои позиции в легковом автопроме, иными словами, попросту лишается их. А страна, у которой нет собственного автомобильного инжиниринга и производства автомобилей, сильно теряет имидж среди мировых игроков, — сетует Денис Мигаль.

Показательно, что новый стратегический план АвтоВАЗа предполагает отказ от производства Lada Vesta, которая является наиболее современной и, судя по всему, последней разработкой отечественного автогиганта. Впрочем, флагманскую модель еще ждет рестайлинг в 2022 году, однако до смены поколений «Веста» уже не доживет. Кроме того, АвтоВАЗ отказался от разработки фургона под условным названием Lada Van, который, как предполагалось ранее, станет перелицованной версией Renault Dokker. Последний, кстати, не так давно покинул российский рынок, поскольку особого спроса в нашей стране так и не снискал. К тому же новый фургон от Lada мог создавать лишнюю конкуренцию «Ларгусу», а это для АвтоВАЗа было бы не к чему.

Что же тольяттинский автогигант предложит взамен? К 2025 году на рынке появятся четыре новых модели Lada, включая совершенно новое поколение внедорожника Niva в 2024 году, а также новый автомобиль сегмента С-SUV в 2025 году. Уже известно, что новая Niva будет выпускаться в двух версиях — с компактной и удлиненной колесной базой. Внедорожник сохранит полный привод и получит рекордный дорожный просвет в 240 мм, а под его капотом в качестве альтернативы вазовскому 1,8-литровому мотору мощностью 122 л.с. будет предложен 150-сильный турбодвигатель объемом 1,3 л, которым сегодня оснащаются Renault Arkana и новый Kaptur. При этом производство нынешнего поколения Lada Niva планируется продолжать вплоть до 2026 года. А вот новым среднеразмерным кроссовером от Lada вполне может стать перелицованный Dacia Bigster, концепт которого был недавно представлен. По сравнению с новым Duster это более крупный автомобиль длиной 4,6 м, при этом не исключено, что он получит семиместный салон.

Ближайшим же новинками АвтоВАЗа станут две модели В-класса — их выход запланирован на 2023 год. По неофициальным данным, речь идет о новом поколении Lada Granta в кузовах «седан» и «универсал», которое разработано на базе третьей генерации Logan/Sandero. Хэтчбека и лифтбека у новой «Гранты» не будет, чтобы не возникало конкуренции с Sandero.

— Смотря на структуру российского рынка, я оцениваю перспективный модельный ряд Lada положительно. АвтоВАЗ не собирается отдавать свой родной сегмент B и также будет сильнее пробиваться в популярный сегмент «паркетников». Сегодня кроссоверы – самый активно растущий на рынке, и расширение модельной гаммы Lada новым городским автомобилем класса C-SUV оправдан, — комментирует консультант компании Simon-Kucher & Partners Иван Кондратенко.

В свою очередь, Денис Мигаль считает совершенно непонятным решение автоконцерна Renault отказаться от современной и популярной модели Lada Vesta и сделать акцент на производстве кроссоверов, которым будет нелегко конкурировать с теми же брендами из Китая.

Стоит отметить, что недавно на АвтоВАЗе сменился шеф-дизайнер марки Lada — им стал Жан-Филипп Салар, который последние пять лет отвечал за разработку дизайна всей линейки Dacia (Duster, новый Sandero, новый Logan, включая Arkana для России). В связи с этим можно ожидать, что новые модели Lada уйдут от фирменного «Икс-дизайна», разработанного его предшественником Стивом Маттином. По крайней мере, об этом красноречиво говорит свежий эскиз новой Niva, которая заметно отличается от представленного в 2018 году концепта Lada 4×4 Vision. В новом варианте перспективный внедорожник лишился фирменных выштамповок на боковинах и Х-образной решетки радиатора, скорее напоминая Renault Arkana.

Как считает старший аналитик ИАЦ «Альпари» Анна Бодрова, потребительское мнение явно указывает на то, что разработанный ранее «Икс-дизайн» очень удачен и с позиции современности моделей, и с точки зрения продаваемости автомобилей, поэтому менять его и «подгонять» под форматы Dacia вряд ли разумно. Кроме того, это потребует дополнительных расходов, которые сейчас совсем не кстати Группе Renault.

— Очень сомнительна и идея унификации Lada с Dacia — рынку не нужен конвейер безликих и совершенно одинаковых автомобилей эконом-класса, спроса на них будет очень мало, учитывая емкость потребительского рынка в России. В этом свете было бы более продуктивно, если бы Lada оставалась как минимум сегодняшней, — рассуждает Анна Бодрова.

Действительно, учитывая, что на платформе CMF-B построены седан Dacia Logan и хэтчбек Sandero нового поколения, которые в нашей стране появятся под брендом Renault, сильная схожесть моделей Lada и Renault может привести к внутреннему «каннибализму». Известно, что до 2025 года компания Renault планирует представить в России пять новинок, в том числе модели, разработанные на платформе CMF-B. Однако даже в случае усиления внутренней конкуренции АвтоВАЗ вряд ли утратит лидерство на российском рынке, предлагая наиболее доступные автомобили.

По мнению ведущего эксперта УК «Финам Менеджмент» Дмитрия Баранова, учитывая, что марки, принадлежащие Renault, сохранят свою самостоятельность, они будут отличаться друг от друга, несмотря на то, что их модели планируется производить на единой платформе. Внешний и внутренний облик автомобилей этих марок будет разным, чтобы дать возможность выбора потребителям, чтобы они меньше конкурировали друг с другом. Скорее всего, будут отличаться и технические характеристики машин, и их цена.

— О том, что АвтоВАЗ вот-вот перестанет быть лидером отечественного автомобильного рынка, говорят уже много лет, однако этого не происходит, вряд ли это произойдет и когда компания перейдет к выпуску автомобилей на новой платформе. Модели Lada все равно будут узнаваемы и продолжат пользоваться спросом среди потребителей. Компания уже давно не является тем производителем, которым была много десятилетий назад, она изменилась. Скорее всего, АвтоВАЗ сохранит ведущие позиции в отечественной автомобильной промышленности в ближайшие годы, а сотрудничество с Renault укрепит его положение и на мировом рынке, — резюмирует Дмитрий Баранов.

все основные изменения — журнал За рулем

Количество моделей и модификаций сократится с 18 до 11, а вместо четырех платформ будет одна. Но на АВТОВАЗе уверены, что это только на пользу.

Материалы по теме

Чем меньше времени будет оставаться до 2023 года, тем больше подробностей станет появляться о том, какими станут автомобили Lada после перехода на платформу Renault CMF-B. Напомним, в 2021 и 2022 годах принципиальных новинок от АВТОВАЗа мы не увидим, зато с 2023 года модельный ряд начнет кардинально преображаться. Вместо нынешних четырех платформ у Lada останется лишь одна.

На 2023 год запланировано появление серийной Гранты второго поколения, у которой будет три модификации (седан, универсал и кросс-универсал), а лифтбек и хэтчбек останутся в прошлом. Затем должна дебютировать новая Веста, в 2024-м появится следующая генерация Нивы (хотя нынешние внедорожники продолжат делать до 2026-го), а в 2025-м — более крупный С-SUV. Ресурс «Автовзгляд» выяснил у представителей Lada Фабьена Гульми и Олега Груненкова некоторые нюансы реформации отечественного бренда. Приводим их списком.

Две из пяти грядущих новинок — это Гранта на базе нового Renault Logan (на фото сверху) и Нива, по которой пока есть только тизерное изображение

Две из пяти грядущих новинок — это Гранта на базе нового Renault Logan (на фото сверху) и Нива, по которой пока есть только тизерное изображение

  • Современная платформа позволит марке Lada вернуться на зарубежные рынки. Главная ставка в этом — на новую Ниву.
  • Переход на технологии и комплектующие Group Renault усилит российскую конструкторскую школу, наши инженеры смогут проявить себя на мировом уровне.
  • Радикально сократятся сроки разработки новых моделей, потому что многие узлы можно будет не создавать с нуля, а брать из обширного ассортимента альянса.
  • АВТОВАЗ не станет заводом отверточной сборки — опасения об этом высказываются уже около 10 лет, но на практике конструкторская работа на предприятии становится интенсивнее и интереснее.
  • Подготовка к освоению новых моделей уже идет: в марте 2021 года АВТОВАЗ показал модернизированную линию сборки, позволяющую, в том числе, вести и производство полноприводных модификаций.

Фото: Renault

Понравилась заметка? Подпишись и будешь всегда в курсе!

За рулем на Google.News

Dacia и Lada объединятся, новая «Нива» получит платформу Renault

[Обновлено] Добавлен официальный видеотизер Lada Niva следующего поколения, листайте вниз страницы.

Сегодня, 14 января, гендиректор группы Renault Лука де Мео представил новый стратегический план, который получил название Renaulution («Ренолюция»).

Программа уже утверждена советом директоров, ее начали выполнять. Ключевая идея – отказ от наращивания объемов производства в пользу увеличения прибыльности. И да, России и нашей «Лады» все это напрямую касается.

Стратегия де Мео разделена на три стадии, их реализация будет осуществляться параллельно.

«Возрождение». До 2023 года группа сосредоточится на восстановлении прибыльности и наращивании денежных средств.

«Обновление». К 2025 году предполагается обновить и расширить товарные линейки брендов с упором на успешные продукты.

«Революция». С 2025 года производитель начнет менять бизнес-модель, ориентируясь на технологии, энергетику и сервисы мобильности. Цель – сделать группу Renault лидером в сфере так называемой «новой мобильности».

Стратегия Renaulution нацелена на восстановление конкурентоспособности. Среди прочего, она включает в себя и «План 2022», озвученный в мае прошлого года и подразумевающий сокращение фиксированных расходов более чем на два миллиарда евро в течение трех лет за счет экономии на инженерно-техническом обеспечении и маркетинге, а также оптимизации производства.

Кроме того, группа будет опираться на свои промышленные активы и лидерство в сегменте электромобилей в Европе. Используя возможности альянса Renault-Nissan-Mitsubishi, она не только расширит продуктовую линейку, но и освоит новые сегменты бизнеса, включая услуги, связанные с энергопотреблением и работой с данными.

Наконец, повышению прибыльности должна способствовать новая простая и прозрачная структура из четырех бизнес-единиц, четко ориентированных на конкретных клиентов и страны. Эффективность этой организации будет оцениваться не по объемам производства и долям на рынке, а исключительно по рентабельности, способности генерировать денежные потоки и эффективности инвестиций.

По замыслу Луки де Мео, Renault должна превратиться из автомобильной компании, занимающейся технологиями, в технологическую компанию, занимающуюся автомобилями. К 2030 году не менее 20% доходов группе будут приносить не машины, а продажа услуг, данных и энергии.

Для повышения инженерной и производственной эффективности группа сократит число используемых платформ с шести до трех, а семейств силовых агрегатов – с восьми до четырех. Все модели, которые предполагается построить на уже существующих шасси, появятся на рынке менее чем через три года. Объемы выпуска автомобилей сократят с 4 миллионов единиц в 2019 году до 3,1 миллиона единиц в 2025 году.

Вышеупомянутые четыре бизнес-единицы – это собственно Renault, Dacia-Lada, Alpine и новое подразделение Mobilize. В совокупности они выпустят к 2025 году 24 новых модели. Половина из них будет относиться к сегментам C и D, не менее 10 будут полностью электрическими.

Титульный бренд Renault займется инновациями, в том числе – за пределами автопрома. В частности, появится совместное предприятие, специализирующееся на водородных технологиях – от топливных ячеек до машин и инфраструктуры. Также компания надеется стать лидером в сфере экономики замкнутого цикла, а еще – зарабатывать на big data и кибербезопасности, для чего французы создают так называемую Software Factory: продвинутую лабораторию на тысячу инженеров и ученых.

Что же касается новых автомобилей для Европы, половина из них будут полностью электрическими, а у остальных появятся гибридные версии. Среди прочего, в виде электрокара возродят Renault 5! Причем Лука де Мео пообещал, что батарейный хэтч окажется доступным – не дороже бензиновых аналогов. Другими ключевыми для себя рынками марка называет Латинскую Америку и Россию.

12 Фотографии

Новый альянс Dacia-Lada ориентирован на создание суперэффективной бизнес-модели. К 2025 году он запустит 7 новинок, включая две в C-сегменте. При этом число используемых «тележек» сократится с четырех до одной (CMF-B), а типов кузова – с 18 до 11. Вместе с тем, объемы производства вырастут с 0,3 до 1,1 миллиона единиц на платформу.

Слухи подтвердились. «Нива» переедет на платформу CMF-B. Причем официально заявлено – в семейство войдут две модели: поменьше и побольше, с удлиненной колесной базой.

Французскую архитектуру получит и «Нива» следующего поколения, дебют которой, как теперь заявлено, намечен на 2024 год. Из деталей пока только дизайнерский набросок (впрочем, довольно интересный).

А у «Дачии» появится новый кроссовер, который уже продемонстрировали в виде концепта Bigster, не раскрыв подробностей. Не хочется о грустном, но, похоже, все идет к тому, что шансы увидеть в будущем самостоятельные разработки АвтоВАЗа на оригинальных платформах стремятся к нулю. Тем не менее, до 2025 года Lada представит, помимо упомянутой «Нивы», четыре свежие модели, в том числе некий SUV C-сегмента.

18 Фотографии

Марка Alpine объединится с подразделениями Renault Sport Cars и Renault Sport Racing в новое «умное» предприятие, занимающееся инновационными спорткарами. Все они будут 100% электрическими. Помимо моделей на уже знакомых платформах CMF-B и CMF-EV, появятся машины, разработанные совместно с Lotus. К 2025 году подразделение должно стать прибыльным, в том числе – за счет отдачи от инвестиций в автоспорт.

Наконец, новыми сервисами мобильности, торговлей энергией и данными займется Mobilize. Оно будет взаимодействовать как с другими брендами группы, так и с внешними партнерами. Ключевые миссии – увеличение «коэффициента использования» автомобиля, повышение остаточной стоимости и приближение к нулевому выбросу CO2.

17 Фотографии

Mobilize разработает четыре специализированных модели: два автомобиля для каршеринга, один для перевозки пассажиров, а также транспортное средство «последней мили».

С финансовой точки зрения «Ренолюция» должна позволить группе Renault выйти на операционную маржу свыше 3% к 2023 году и не менее 5% к 2025 году.

доноров и акцепторов: новые события во FRET | Сентябрь 2009 г.


Перенос энергии резонанса Фёрстера, или FRET, внес свой вклад в развитие множества приложений. Измерение передачи энергии между донорными и акцепторными красителями, прикрепленными к двум концам молекулы или к двум разным молекулам, сближенным, позволяет исследователям исследовать ряд биологических процессов, включая взаимодействия белок-белок и белок-ДНК, связывание лиганд-рецептор и конформационные изменения белка в ответ на биологический стимул.Это также позволяет им исследовать пространственные отношения в биологических структурах и макромолекулах, отслеживая расстояние между двумя сайтами, меченными флуорофором.

FRET-микроскопия оказалась популярным средством характеристики молекулярных взаимодействий в живых организмах. Кроме того, эта способность к межмолекулярному зондированию облегчает различные биоаналитические и биосенсорные приложения.


Исследователи сообщили о методе FRET, в котором используются многослойные наночастицы ядро-оболочка для использования явления, известного как усиленная металлом флуоресценция. Здесь показано схематическое изображение усиленного металлом FRET в наночастицах. Серебряное ядро ​​окружено концентрическими слоями молекул флуорофора, а расстояние между ними точно регулируется путем добавления спейсера из диоксида кремния контролируемой толщины. Связь ядра с молекулами флуорофора увеличивает расстояние, на котором происходит FRET, и значительно усиливается интенсивность флуоресценции.

Разработка техники продолжается. В последние годы FRET извлек выгоду из множества новых компонентов и методологий.Улучшения стали возможны, сказал Сапна К. Део, доцент кафедры биоаналитической химии Университета Индианы и Университета Пердью в Индианаполисе, благодаря доступности недорогих мощных лазеров и детекторов, таких как лавинные фотодиоды и фотонные умножители, благодаря развитию флуоресцентной микроскопии. а также за счет разработки лучших фильтров, лучшего программного обеспечения для анализа данных и лучших камер.

По ее словам, использование новых доноров и акцепторов добавило дополнительных преимуществ в его разработку.Обычные флуорофоры, используемые с FRET, включая органические красители, флуоресцентные белки, хемилюминесцентные субстраты и флуоресцентные полимеры, часто имеют ограниченные возможности. Их узкие окна возбуждения и широкие излучения могут привести к спектральному перекрытию между донором и акцептором, например, что может вызвать головную боль, особенно при мониторинге взаимодействий между двумя или более парами донор-акцептор с мультиплексированным FRET. Другие проблемы — ограниченная фотостабильность и возможность фотообесцвечивания и фотодеградации.Исследователи изучили несколько альтернатив, чтобы обойти эти проблемы. В последние годы появились металлические наночастицы и биолюминесценция для улучшения FRET. Каждый из них предлагает уникальный набор преимуществ по сравнению с обычными флуорофорами и, таким образом, может улучшить методику для широкого спектра приложений.

Флюоресценция, усиленная металлами
В Квебеке исследователи добились улучшения FRET с помощью многослойных наночастиц ядро-оболочка, чтобы воспользоваться преимуществом явления, известного как флуоресценция, усиленная металлами. Размещение донорно-акцепторных пар вокруг металлических наночастиц или рядом с ними приводит к возникновению связи между локальным электрическим полем от источника возбуждения, электронами в металле и электрическим диполем, индуцированным в молекулах красителя, что увеличивает силу донорно-акцепторных взаимодействий и, таким образом, улучшает Эффективность FRET.

Дени Будро, профессор аналитической химии и член Центра оптики, фотоники и лазеров Университета Лаваля в Квебеке, понял, что эффективность этого подхода сильно зависит от разделения металла и флуорофора, и поэтому исследователи может максимизировать его, получая точный контроль над этим расстоянием.С этой целью в статье Nano Letters, опубликованной в Интернете 15 июля, он и другие сотрудники его лаборатории — докторант Матье Лессар-Вигер при поддержке аспирантов Максима Риу и Люка Рейнвилля — сообщили об исследовании, в котором они изготовили наночастицы типа ядро-оболочка. и химически привитые молекулы флуорофора в концентрических оболочках из диоксида кремния, чтобы они могли произвольно регулировать расстояние между флуорофором и металлом для оптимизации усиления FRET.

Эти новые люминесцентные наночастицы имеют два важных преимущества, сказал Будро.Во-первых, они приводят к значительному увеличению интенсивности флуоресценции. Исследователи сообщили о пятнадцатикратном увеличении количества частиц, используемых в исследовании Nano Letters, и ожидают еще большего увеличения при использовании более тонких разделительных оболочек в своей конструкции. Что еще более важно, использование наночастиц привело к значительному увеличению FRET.

Будро и его коллеги рассчитали, что эффективность передачи энергии между донором и акцептором составляет 56 процентов, в отличие от эффективности только 12 процентов для наночастиц, у которых металлическое ядро ​​вытравлено.Кроме того, они отметили, что расстояние Ферстера — диапазон, при котором эффективность передачи энергии составляет 50 процентов — было на 30 процентов выше, чем опубликованное для системы флуоресцеин-эозин.

Это увеличение расстояния Ферстера позволяет рекомендовать наночастицы для различных применений в визуализационной микроскопии и биодатчиках, пояснил Будро; например, путем конъюгирования их с биомолекулами и использования в качестве донорно-акцепторных пар дальнего действия.

Исследователи продолжают разрабатывать наночастицы, ориентируясь на эти и другие приложения, включая сверхчувствительное обнаружение ДНК.Они также планируют адаптировать их к мультиплексной передаче сигналов, варьируя их красители и относительные концентрации, а также настраивая их сигнатуры излучения.

Биолюминесцентный резонансный перенос энергии
Биолюминесцентный резонансный перенос энергии, или BRET, представляет собой еще один важный шаг вперед в этой области. Этот метод, в котором используются биолюминесцентный донор и флуоресцентный акцептор, преодолевает многие препятствия, связанные с методами на основе FRET. Во-первых, поскольку он не требует внешнего источника возбуждения, как последние методы, он менее дорог и обеспечивает повышенную эффективность для приложений in vivo.Кроме того, он не имеет тех же проблем, что и FRET, с фотообесцвечиванием и одновременным возбуждением донорных и акцепторных флуорофоров и, как следствие, предлагает значительно сниженный фоновый шум. Наконец, он более совместим с светочувствительными тканями, чем методы на основе FRET.


Ученые описали метод биолюминесцентного резонансного переноса энергии, в котором люцифераза Renilla используется в качестве биолюминесцентного донора, а квантовые точки — в качестве акцепторов. В описанной системе используются два зонда: один, конъюгированный с люциферазой Renilla и комплементарный целевой последовательности (зонд Rluc на этом рисунке), другой, конъюгированный с квантовой точкой и гомологичный целевой последовательности (целевой зонд).Когда нуклеиновая кислота-мишень отсутствует, два зонда гибридизуются, приближая люциферазу и квантовую точку друг к другу и, таким образом, производя сигнал BRET.

Лаборатория Део занимается разработкой основанных на BRET методов количественного определения микроРНК. По ее словам, микроРНК играют важную роль в регуляции генов и, таким образом, привлекают внимание как клинически как биомаркеры заболеваний, так и в фундаментальных биомедицинских исследованиях. Исследователи в лаборатории разработали методику на основе BRET, в которой люцифераза Renilla используется в качестве биолюминесцентного донора и квантовые точки в качестве акцепторов, и они описали ее использование для обнаружения ДНК.Сообщаемая система BRET использует два линейных олигонуклеотидных зонда. Первый, конъюгированный с люциферазой Renilla, комплементарен целевой последовательности. Другой, конъюгированный с квантовой точкой, гомологичен целевой последовательности. Два зонда гибридизуются, когда нуклеиновая кислота-мишень отсутствует, сближая люциферазу и квантовую точку и создавая сигнал BRET.

Однако, когда целевая нуклеиновая кислота присутствует, она конкурирует с зондом люциферазы за гибридизацию зонда квантовой точки.Это приводит к снижению сигнала BRET и увеличению эмиссии люциферазы, что позволяет исследователям измерять нуклеиновую кислоту.

Для количественного определения ДНК исследователи построили калибровочную кривую соотношения BRET в зависимости от целевой концентрации. Они рассчитали отношение BRET как интенсивность биолюминесценции при 485 нм, деленную на интенсивность биолюминесценции при 705 нм. Основываясь на полученном соотношении, они количественно определили количество ДНК-мишени по уравнению калибровочной кривой.

Исследователи продолжают развивать методику и работают над мультиплексным обнаружением нуклеиновых кислот-мишеней в фазе раствора. Это может быть достигнуто с помощью нескольких спектрально различных квантовых точек. Из-за перекрывающихся спектров поглощения несколько квантовых точек можно возбуждать одновременно с помощью одного источника, такого как люцифераза Renilla.

«Таким образом, — сказал Део, — используя люциферазу Renilla в качестве доноров BRET и множественные квантовые точки в качестве акцепторов BRET, можно добиться мультиплексной детекции». Последовательности ДНК олигонуклеотидных зондов необходимо изменить только для специфической гибридизации с соответствующими мишенями ».

Также см .: Дополнительные веб-эксклюзивы


Недавние разработки FRET из лантанидов в квантовые точки с использованием временной флуоресценции и преобразования фотонов с повышением частоты

Основные особенности

Принципы преобразования лантаноидов в квантовые точки FRET для биоанализа

Спектроскопические / молекулярные линейки FRET для анализа морфологии квантовых точек.

Мультиплексные иммуноанализы FRET для клинической диагностики.

Мутиплексированная ДНК FRET и обнаружение микроРНК с использованием комплексов тербия и наночастиц с повышающим преобразованием.

Реле FRET между тербием и квантовой точкой и FRET между тербием и квантовой точкой и красителем для внутри- и внеклеточного биосенсинга.

Abstract

Ионы лантаноидов (Ln) и квантовые точки (КТ) обеспечивают нам исключительные фотофизические свойства, которые нельзя найти ни в одном другом люминесцентном материале.Поэтому длительное время жизни люминесценции супрамолекулярных комплексов Ln, сочетание возбуждения в ближней инфракрасной области и видимой люминесценции наночастиц с повышающим преобразованием, легированных Ln, а также возможность настройки цвета и высокая яркость КТ широко используются в биоаналитических приложениях. Одним из наиболее часто используемых методов анализа биомолекулярных взаимодействий является FRET (резонансный перенос энергии Ферстера), а пара FRET донорно-акцепторного Ln-QD является одним из наиболее универсальных инструментов для биосенсинга FRET.Прогресс в развитии технологий в биологии, химии и физике значительно продвинул FRET Ln-to-QD за последние пять лет, и современные подходы к биосенсорному анализу включают мультиплексное обнаружение микроРНК, гомогенные клинические иммуноанализы, анализ морфологии QD-биоконъюгата и внутри- и внеклеточная биочувствительность. Здесь мы выделим концепции и преимущества Ln-to-QD FRET и обсудим недавний прогресс и новые приложения.

Ключевые слова

Биосенсор

Тербий

Мультиплексирование

Спектроскопия

Визуализация

микроРНК

Иммуноанализа

Иммуноокрашивание

Статьи

Чувствительность

.V. Все права защищены.

Рекомендуемые статьи

Ссылки на статьи

Последние разработки в диагностике резонансного переноса энергии (FRET) по Фёрстеру с использованием квантовых точек

  • 1.

    Рейсс П., Протир М., Ли Л. Полупроводниковые нанокристаллы ядра / оболочки. Небольшой. 2009. 5 (2): 154–68.

    CAS Статья Google Scholar

  • 2.

    Algar WR, Tavares AJ, Krull UJ. Помимо этикеток: обзор применения квантовых точек в качестве интегрированных компонентов анализов, биозондов и биосенсоров, использующих оптическое преобразование.Анальный Чим Акта. 2010. 673 (1): 1–25.

    CAS Статья Google Scholar

  • 3.

    Algar WR, Susumu K, Delehanty JB, Medintz IL. Полупроводниковые квантовые точки в биоанализе: переход через долину смерти. Anal Chem. 2011. 83 (23): 8826–37.

    CAS Статья Google Scholar

  • 4.

    Джин З. В., Хильдебрандт Н. Полупроводниковые квантовые точки для диагностики in vitro и визуализации клеток.Trends Biotechnol. 2012. 30 (7): 394–403.

    CAS Статья Google Scholar

  • 5.

    Петряева Э., Алгар В.Р., Мединц ИЛ. Квантовые точки в биоанализе: обзор приложений на различных платформах для флуоресцентной спектроскопии и визуализации. Appl Spectrosc. 2013. 67 (3): 215–52.

    CAS Статья Google Scholar

  • 6.

    Вегнер К.Д., Хильдебрандт Н. Квантовые точки: яркие и универсальные биосенсоры флуоресцентной визуализации in vitro и in vivo. Chem Soc Rev.2015; 44 (14): 4792–834.

    CAS Статья Google Scholar

  • 7.

    Алгар В.Р., Прасун Д.Е., Стюарт М.Х., Дженнингс Т.Л., Бланко-Каноса Дж.Б., Доусон П.Е. и др. Контролируемое отображение биомолекул на наночастицах: задача, подходящая для биоортогональной химии. Bioconj Chem. 2011. 22 (5): 825–58.

    CAS Статья Google Scholar

  • 8.

    Сапсфорд К.Э., Алгар В.Р., Берти Л., Джеммилл К.Б., Кейси Б.Дж., О Э. и др.Функционализация наночастиц с помощью биологических молекул: разработка химии, которая способствует нанотехнологиям. Chem Rev.2013; 113 (3): 1904–2074.

    CAS Статья Google Scholar

  • 9.

    Blanco-Canosa JB, Wu M, Susumu K, Petryayeva E, Jennings TL, Dawson PE, et al. Недавний прогресс в биоконъюгации квантовых точек. Coord Chem Rev.2014; 263: 101–37.

    Артикул Google Scholar

  • 10.

    Weiss S, Bruchez M Jr., Alivisators P, изобретатели; Регенты Калифорнийского университета, правопреемник. Органолюминесцентные полупроводниковые нанокристаллические зонды для биологических применений и способ изготовления и использования таких зондов. US0059

  • A. US1999, подана 25 ноября 1997 г.

  • 11.

    FRET — Фёрстеровский резонансный перенос энергии: от теории к приложениям. Wiley-VCH; 2014.

  • 12.

    Хильдебрандт Н. Биофункциональные квантовые точки: управляемая конъюгация для мультиплексных биосенсоров.САУ Нано. 2011; 5 (7): 5286–90.

    CAS Статья Google Scholar

  • 13.

    Гейсслер Д., Линден С., Лирманн К., Вегнер К.Д., Шарбоньер Л.Дж., Хильдебрандт Н. Лантаноиды и квантовые точки как агенты передачи энергии резонанса Фёрстера для диагностики и визуализации клеток. Inorg Chem. 2014; 53 (4): 1824–38.

    Артикул Google Scholar

  • 14.

    Curutchet C, Franceschetti A, Zunger A, Scholes GD.Изучение переноса энергии Ферстера для полупроводниковых нанокристаллических доноров и акцепторов квантовых точек. J. Phys Chem C. 2008; 112 (35): 13336–41.

    CAS Статья Google Scholar

  • 15.

    Вегнер К.Д., Джин З.В., Линден С., Дженнингс Т.Л., Хильдебрандт Н. Иммуноферментный анализ с резонансным переносом энергии Фёрстера на основе квантовых точек для чувствительной клинической диагностики образцов сыворотки малого объема. САУ Нано. 2013. 7 (8): 7411–9.

    CAS Статья Google Scholar

  • 16.

    Wegner KD, Linden S, Jin ZW, Jennings TL, el Khoulati R, Henegouwen PMPVE и др. Нанотела и нанокристаллы: высокочувствительный гомогенный иммуноферментный анализ на основе квантовых точек для определения EGFR на основе сыворотки. Небольшой. 2014; 10 (4): 734–40.

    CAS Статья Google Scholar

  • 17.

    Хильдебрандт Н., Гейсслер Д. Полупроводниковые квантовые точки как акцепторы FRET для мультиплексной диагностики и применения молекулярной линейки. Adv Experim Med Biol.2012; [2011/11/22 ed]: 75–86.

  • 18.

    Гейсслер Д., Шарбоньер Л.Дж., Циссель Р.Ф., Бутлин Н.Г., Ломансрёбен Х.Г., Хильдебрандт Н. Биосенсоры на квантовых точках для сверхчувствительной мультиплексной диагностики. Angew Chem Int Ed. 2010. 49 (8): 1396–401.

    Артикул Google Scholar

  • 19.

    Петряева Э., Алгар В.Р. Работа для квантовых точек: использование смартфона и напечатанного на 3D-принтере аксессуара для комплексного возбуждения и визуализации фотолюминесценции.Anal Bioanal Chem. 2016. DOI: 10.1007 / s00216-015-9300-3.

  • 20.

    Петряева Э., Алгар В.Р. К диагностике на месте с помощью бытовых электронных устройств: возрастающая роль наночастиц. Res Adv. 2015; 5 (28): 22256–82.

    CAS Google Scholar

  • 21.

    Чжу Х., Сикора У., Озкан А. Квантовые точки позволили обнаружить кишечную палочку с помощью мобильного телефона. Аналитик. 2012. 137 (11): 2541–4.

    CAS Статья Google Scholar

  • 22.

    Мин К., Ким Дж., Бионди М.Дж., Сайед А., Чен К., Лам А. и др. Интегрированное оптическое устройство смартфона со штрих-кодом с квантовыми точками для беспроводной мультиплексной диагностики инфицированных пациентов. САУ Нано. 2015; 9 (3): 3060–74.

    CAS Статья Google Scholar

  • 23.

    Петряева Э., Алгар В.Р. Протеолитические анализы на бумажных подложках, модифицированных квантовыми точками, с использованием простых оптических считывающих платформ. Anal Chem. 2013. 85 (18): 8817–25.

    CAS Статья Google Scholar

  • 24.

    Петряева Е., Алгар В.Р. Мультиплексные гомогенные анализы протеолитической активности с использованием смартфона и квантовых точек. Anal Chem. 2014. 86 (6): 3195–202.

    CAS Статья Google Scholar

  • 25.

    Петряева Э., Алгар В.Р. Одностадийные биоанализы сыворотки и цельной крови с использованием смартфона, квантовых точек и чипов «бумага в PDMS». Аналитик. 2015; 140 (12): 4037–45.

    CAS Статья Google Scholar

  • 26.

    Noor MO, Krull UJ. Ратиометрическая флуоресцентная трансдукция гибридизации нуклеиновых кислот с помощью камеры с безреагентным усилением сигнала на бумажной платформе с использованием иммобилизованных квантовых точек в качестве доноров. Anal Chem. 2014; 86 (20): 10331–9.

    CAS Статья Google Scholar

  • 27.

    Freeman R, Liu XQ, Willner I. Амплифицированный мультиплексный анализ ДНК с помощью катализируемой экзонуклеазой III регенерации целевой ДНК в присутствии функционализированных полупроводниковых квантовых точек. Nano Lett. 2011. 11 (10): 4456–61.

    CAS Статья Google Scholar

  • 28.

    Qiu X, Hildebrandt N. Быстрый и мультиплексированный диагностический анализ микроРНК с использованием квантовых точек на основе резонансного переноса энергии Фёрстера. САУ Нано. 2015; 9 (8): 8449–57.

    CAS Статья Google Scholar

  • 29.

    Geißler D, Stufler S, Löhmannsröben H-G, Hildebrandt N. Шестикрасочный резонансный перенос энергии Фёрстера с временным разрешением для сверхчувствительного мультиплексного биочувствительности.J Am Chem Soc. 2013. 135 (3): 1102–9.

    Артикул Google Scholar

  • 30.

    Jin ZW, Geissler D, Qiu X, Wegner KD, Hildebrandt N. Быстрый, чувствительный и не требующий амплификации диагностический анализ для одноэтапного мультиплексного флуоресцентного обнаружения микроРНК. Angew Chem Int Ed. 2015; 54 (34): 10024–9.

    CAS Статья Google Scholar

  • 31.

    Algar WR, Ancona MG, Malanoski AP, Susumu K, Medintz IL.Сборка концентрического реле передачи энергии резонанса Фёрстера на каркасе из квантовых точек: характеристика и применение для определения мультиплексной протеазы. САУ Нано. 2012. 6 (12): 11044–58.

    CAS Статья Google Scholar

  • 32.

    Алгар В. Р., Вегнер Д., Хьюстон А. Л., Бланко-Каноса Дж. Б., Стюарт М. Х., Армстронг А. и др. Квантовые точки как одновременные акцепторы и доноры в синхронизированных по времени реле Фёрстера резонансной передачи энергии: характеристика и биосенсор.J Am Chem Soc. 2012; 134 (3): 1876–91.

    CAS Статья Google Scholar

  • 33.

    Алгар В. Р., Маланоски А. П., Сусуму К., Стюарт М. Х., Хильдебрандт Н., Мединц Иллинойс. Мультиплексное отслеживание активности протеазы с использованием одного цвета вектора квантовой точки и реле передачи энергии резонанса Фёрстера с синхронизацией по времени. Anal Chem. 2012. 84 (22): 10136–46.

    CAS Статья Google Scholar

  • 34.

    Claussen JC, Algar WR, Hildebrandt N, Susumu K, Ancona MG, Medintz IL. Биофотонные логические устройства на основе квантовых точек и смещенных во времени реле передачи энергии Фёрстера. Наноразмер. 2013. 5 (24): 12156–70.

    CAS Статья Google Scholar

  • 35.

    Claussen JC, Hildebrandt N, Susumu K, Ancona MG, Medintz IL. Сложные логические функции, реализованные с помощью бионанофотонных схем с квантовыми точками. ACS Appl Mater Interf. 2014. 6 (6): 3771–8.

    CAS Статья Google Scholar

  • 36.

    Pfleger KDG, Eidne KA. Освещение межбелковых взаимодействий с использованием биолюминесцентного резонансного переноса энергии (BRET). Нат методы. 2006; 3 (3): 165.

    CAS Статья Google Scholar

  • 37.

    Xia ZY, Rao JH. Биосенсор и визуализация на основе биолюминесцентного резонансного переноса энергии. Curr Opin Biotechnol.2009. 20 (1): 37–44.

    CAS Статья Google Scholar

  • 38.

    Хуанг XY, Ren JC. Резонансный перенос энергии хемилюминесценции на основе наноматериалов: стратегия разработки новых аналитических методов. TrAC Trends Anal Chem. 2012; 40: 77–89.

    CAS Статья Google Scholar

  • 39.

    Чен Х, Линь Л., Ли Х, Лин Дж.М. Хемилюминесценция, усиленная квантовыми точками: механизм и применение.Coord Chem Rev.2014; 263: 86–100.

    Артикул Google Scholar

  • 40.

    Со М.К., Сюй СиДжей, Лоенинг А.М., Гамбхир С.С., Рао Дж. Х. Самосветящиеся конъюгаты квантовых точек для визуализации in vivo. Nat Biotechnol. 2006. 24 (3): 339–43.

    CAS Статья Google Scholar

  • 41.

    Quinones GA, Miller SC, Bhattacharyya S, Sobek D, Stephan J-P. Сверхчувствительное обнаружение клеточных белковых взаимодействий с использованием нанозондов на основе квантовых точек с биолюминесцентным резонансным переносом энергии.J Cell Biochem. 2012. 113 (7): 2397–405.

    CAS Статья Google Scholar

  • 42.

    Hsu C-Y, Chen C-W, Yu H-P, Lin Y-F, Lai P-S. Биолюминесцентный резонансный перенос энергии с использованием квантовых точек с иммобилизованной люциферазой для самосветящейся фотодинамической терапии. Биоматериалы. 2013; 34 (4): 1204–12.

    CAS Статья Google Scholar

  • 43.

    Сонг В.С., Шин С.В., Пак К.С., Джанг М.С., Чой Дж.Х., О Би-К и др.Самосветящиеся противораковые терапевтические кассеты с каскадными реакциями, изготовленные из совместно взаимодействующих нанокомплексов. Коллоиды Surf B Биоинтерфейсы. 2015; 126: 580–4.

    CAS Статья Google Scholar

  • 44.

    Алам Р., Зилстра Дж., Фонтейн Д.М., Бранчини Б.Р., Мэй ММ. Новый многоступенчатый перенос энергии BRET-FRET с использованием наноконъюгатов белков светлячков, квантовых точек и красных флуоресцентных белков. Наноразмер. 2013. 5 (12): 5303–6.

    CAS Статья Google Scholar

  • 45.

    Dwyer CL, Díaz SA, Walper SA, Samanta A, Susumu K, Oh E, et al. Хемоэнзиматическая сенсибилизация фотонных проводов ДНК посредством реле передачи энергии квантовых точек. Chem Mater. 2015; 27: 6490–4.

    CAS Статья Google Scholar

  • 46.

    Samanta A, Walper SA, Susumu K, Dwyer CL, Medintz IL. Ферментативно сенсибилизированное последовательное и концентрическое реле передачи энергии, самоорганизующееся вокруг полупроводниковых квантовых точек.Наноразмер. 2015; 7 (17): 7603–14.

    CAS Статья Google Scholar

  • 47.

    Хуанг X, Ли Л, Цянь Х, Донг С., Рен Дж. Резонансный перенос энергии между хемилюминесцентными донорами и люминесцентными квантовыми точками в качестве акцепторов (CRET). Angew Chem Int Ed. 2006. 45 (31): 5140–3.

    CAS Статья Google Scholar

  • 48.

    Ниязов А., Фриман Р., Гирш Дж, Виллнер И. После активности глюкозооксидазы посредством процессов хемилюминесценции и резонансного переноса энергии хемилюминесценции (CRET) с участием конъюгатов фермент-ДНКзим.Датчики. 2011; 11 (11): 10388–97.

    CAS Статья Google Scholar

  • 49.

    Hu L, Liu X, Cecconello A, Willner I. Двойная переключаемая CRET-индуцированная люминесценция квантовых точек (QD) CdSe / ZnS за счет агрегации мостиковых гемин / G-квадруплекс и дезагрегации квантовых точек двух размеров . Nano Lett. 2014. 14 (10): 6030–5.

    CAS Статья Google Scholar

  • 50.

    Liu XQ, Freeman R, Golub E, Willner I.Аптамерные сенсоры с хемилюминесценцией и резонансным переносом энергии хемилюминесценции (CRET) с использованием каталитических гемин / G-квадруплексов. САУ Нано. 2011; 5 (9): 7648–55.

    CAS Статья Google Scholar

  • 51.

    Freeman R, Girsh J, Jou AFJ, Ho JAA, Hug T, Dernedde J и др. Оптические аптасенсоры для анализа фактора роста эндотелия сосудов (VEGF). Anal Chem. 2012. 84 (14): 6192–8.

    CAS Статья Google Scholar

  • 52.

    Лю X, Ниязов-Элкан А., Ван Ф., Виллнер И. Переключение фотонных и электрохимических функций ДНКзима с помощью ДНК-машин. Nano Lett. 2013. 13 (1): 219–25.

    CAS Статья Google Scholar

  • 53.

    Freeman R, Liu XQ, Willner I. Хемилюминесцентный и хемилюминесцентный резонансный перенос энергии (CRET) обнаружение ДНК, ионов металлов и комплексов аптамер-субстрат с использованием гемин / G-квадруплексов и квантовых точек CdSe / ZnS. J Am Chem Soc.2011. 133 (30): 11597–604.

    CAS Статья Google Scholar

  • 54.

    Джонсон Б.Дж., Алгар В.Р., Маланоски А.П., Анкона, М.Г., Мединц, Иллинойс. Понимание ферментативного ускорения на границах раздела наночастиц: подходы и проблемы. Нано сегодня. 2014. 9 (1): 102–31.

    CAS Статья Google Scholar

  • 55.

    Breger JC, Ancona MG, Walper SA, Oh E, Susumu K, Stewart MH, et al.Понимание того, как прикрепление наночастиц увеличивает кинетическую эффективность фосфотриэстеразы. САУ Нано. 2015; 9 (8): 8491–503.

    CAS Статья Google Scholar

  • Количественный анализ анализа FRET в биологии — новые разработки в определении аффинности взаимодействия белков и кинетики протеаз в каскаде SUMOylation

  • Albertazzi L, Arosio D, Marchetti L, Ricci F, Beltram F (2009). Количественный FRET-анализ с парой флуоресцентных белков EGFP-mCherry.Photochem Photobiol, 85 (1): 287–297

    PubMed CAS Статья Google Scholar

  • Андреу А.М., Тавернаракис Н. (2009). СУМОилирование и клеточная сигнализация. Biotechnol J, 4 (12): 1740–1752

    PubMed CAS Статья Google Scholar

  • Бендикс П. М., Педерсен М. С., Стаму Д. (2009). Количественная оценка наноразмерных площадей межмембранного контакта с использованием флуоресцентного резонансного переноса энергии.Proc Natl Acad Sci USA, 106 (30): 12341–12346

    PubMed CAS Статья Google Scholar

  • Бюхер Х, Дрексхаге К. Х, Флек М., Кун Х, Мёбиус Д., Шефер Ф. П., Зондерманн Дж., Сперлинг В., Тиллманн П., Виганд Дж. (1967). Контролируемая передача энергии возбуждения через тонкие слои. Мол Крист, 2 (3): 199–230

    Артикул Google Scholar

  • Ченг А К Х, Су Х, Ван И А, Ю Х З (2009).Обнаружение на основе аптамеров эпителиального опухолевого маркера муцина 1 с помощью считывания флуоресценции на основе квантовых точек. Anal Chem, 81 (15): 6130–6139

    PubMed CAS Статья Google Scholar

  • Dams G, Ван Акер К., Гастин Э., Верейкен И., Бункенс Л., Холманс П., Смеулдерс Л., Клейтон Р., Охаген А., Хертогс К. (2007). Анализ флуоресценции с временным разрешением для идентификации низкомолекулярных ингибиторов слияния ВИЧ-1. J Biomol Screen, 12 (6): 865–874

    PubMed CAS Статья Google Scholar

  • dos Remedios C G, Moens P D (1995).Спектроскопия флуоресцентного резонансного переноса энергии является надежным «правителем» для измерения структурных изменений белков. Решение проблемы неизвестного фактора ориентации. J Struct Biol, 115 (2): 175–185

    PubMed Статья Google Scholar

  • Eis PS, Olson MC, Takova T, Curtis ML, Olson SM, Vener T.I, Ip HS, Vedvik KL, Bartholomay CT, Allawi HT, Ma WP, Hall JG, Morin MD, Rushmore TH, Лямичев В.И., Квятковский RW (2001).Анализ инвазивного расщепления для прямого количественного определения конкретных РНК. Nat Biotechnol, 19 (7): 673–676

    PubMed CAS Статья Google Scholar

  • Элангован М., Валлраб Х., Чен Й, Дэй Р. Н., Баррозу М., Периасами А. (2003). Характеристика одно- и двухфотонной флуоресцентной микроскопии с резонансным переносом энергии. Методы, 29: 58–73

    PubMed CAS Статья Google Scholar

  • Фёрстер Т. (1948).Zwischenmolekulare energiewanderung und fluoreszenz. Ann Phys, 437 (1-2): 55–75

    Статья Google Scholar

  • Гамбин Ю., Дениз А.А. (2010). Многоцветный одномолекулярный FRET для изучения сворачивания и связывания белков. Мол Биосист, 6 (9): 1540–1547

    PubMed CAS Статья Google Scholar

  • Гаро Дж. Р., Лима, Д. Д. (2010). Путь SUMO: новые механизмы, которые формируют специфичность, конъюгацию и узнавание.Nat Rev Mol Cell Biol, 11 (12): 861–871

    PubMed CAS Статья Google Scholar

  • Гордон Г. В., Берри Г., Лян Х Х, Левин Б., Герман Б. (1998), Количественные измерения резонансного переноса энергии флуоресценции с использованием флуоресцентной микроскопии. Biophys J, 74: 2702–2713

    PubMed CAS Статья Google Scholar

  • Хаугланд Р. П., Игерабид Дж., Страйер Л. (1969).Зависимость кинетики синглет-синглетного переноса энергии от спектрального перекрытия. Proc Natl Acad Sci USA, 63 (1): 23–30

    PubMed CAS Статья Google Scholar

  • Hires S. A., Zhu Y, Tsien R Y (2008). Оптическое измерение синаптического распространения и обратного захвата глутамата линкер-оптимизированными глутаматочувствительными флуоресцентными репортерами. Proc Natl Acad Sci USA, 105 (11): 4411–4416

    PubMed CAS Статья Google Scholar

  • Джонсон Э. С. (2004).Модификация белков с помощью СУМО. Анну Рев Биохим, 73 (1): 355–382

    PubMed CAS Статья Google Scholar

  • Кам З., Вольберг Т., Гейгер Б. (1995). Картирование компонентов спаек с использованием микроскопической резонансной передачи энергии. J Cell Sci, 108 (Pt 3): 1051–1062

    PubMed CAS Google Scholar

  • Кенуорти А. К. (2001). Визуализация белок-белковых взаимодействий с использованием флуоресцентной резонансной микроскопии с переносом энергии.Методы, 24 (3): 289–296

    PubMed CAS Статья Google Scholar

  • Лам А. Д., Исмаил С., Ву Р., Ижар О., Пассмор Д. Р., Эрнст С. А., Стуенкель Е. Л. (2010). Отображение динамических взаимодействий белков с поведением секреторных гранул инсулина с помощью TIRF-FRET. Biophys J, 99 (4): 1311–1320

    PubMed CAS Статья Google Scholar

  • Лу С., Ван И (2010).Флуоресцентные биосенсоры с резонансным переносом энергии для обнаружения рака и оценки эффективности лекарств. Clin Cancer Res, 16 (15): 3822–3824

    PubMed CAS Статья Google Scholar

  • Махаджан Н. П., Линдер К., Берри Г., Гордон Г. В., Хайм Р., Герман Б. (1998). Взаимодействия Bcl-2 и Bax в митохондриях, исследованные зеленым флуоресцентным белком, и резонансный перенос энергии флуоресценции. Nat Biotechnol, 16 (6): 547–552

    PubMed CAS Статья Google Scholar

  • Мартин С. Ф., Татхам М. Х, Хэй Р. Т., Самуэль И. Д. (2008).Количественный анализ мультибелковых взаимодействий с использованием FRET: приложение к пути SUMO. Protein Sci, 17 (4): 777–784

    PubMed CAS Статья Google Scholar

  • Мехта К., Хоппе А. Д., Каинкарьям Р., Вульф П. Дж., Линдерман Дж. Дж. (2009). Вычислительный подход к выводу сродства связывания клеточного белка на основе количественной флюоресцентной резонансной передачи энергии. Протеомика, 9 (23): 5371–5383

    PubMed CAS Статья Google Scholar

  • Торговец К. А., Бест R B, Луи Дж. М., Гопич И. В., Итон В. А. (2007).Характеристика развернутых состояний белков с помощью FRET-спектроскопии одиночных молекул и молекулярного моделирования. Proc Natl Acad Sci USA, 104 (5): 1528–1533

    PubMed CAS Статья Google Scholar

  • Нгуен А. В., Догерти П. С. (2005). Эволюционная оптимизация флуоресцентных белков для внутриклеточного FRET. Nat Biotechnol, 23 (3): 355–360

    PubMed CAS Статья Google Scholar

  • Padilla-Parra S, Audugé N, Coppey-Moisan M, Tramier M (2008).Количественный FRET-анализ с помощью быстрого сбора данных FLIM во временной области с высоким пространственным разрешением в живых клетках. Biophys J, 95 (6): 2976–2988

    PubMed CAS Статья Google Scholar

  • Питер М., Амир-Бег С.М., Хьюз М.К., Кепплер М.Д., Прага С., Марш М., Войнович Б., Нг Т. (2005). Многофотонный-FLIM количественный анализ пары EGFP-mRFP1 FRET для локализации взаимодействий мембранных рецепторкиназ. Biophys J, 88 (2): 1224–1237

    PubMed CAS Статья Google Scholar

  • Прасун Д. Е., Фельц А., Бланко-Каноса Дж. Б., Сусуму К., Стюарт М. Х, Мей Б. С., Яковлев А. В., Луков С., Маллет Дж. М., Охейм М., Доусон П. Е., Мединц И. Л. (2010).Пептидные биосенсоры на квантовых точках для мониторинга протеолиза каспазы 3 и ионов кальция. АСУ Нано, 4 (9): 5487–5497

    PubMed CAS Статья Google Scholar

  • Reverter D, Lima C D, (2006). Структурная основа взаимодействия протеазы SENP2 с предшественниками SUMO и конъюгированными субстратами. Nat Struct Mol Biol, 13 (12): 1060–1068

    PubMed CAS Статья Google Scholar

  • Saucerman J J, Zhang J, Martin J C, Peng L X, Stenbit A E, Tsien R Y, McCulloch A. D. (2006).Системный анализ градиентов PKA-опосредованного фосфорилирования в живых сердечных миоцитах. Proc Natl Acad Sci USA, 103 (34): 12923–12928

    PubMed CAS Статья Google Scholar

  • Шен Л., Татхам М. Х., Донг С., Загорска А., Нейсмит Дж. Х., Хэй Р. Т. (2006). SUMO протеаза SENP1 индуцирует изомеризацию ножницеобразной пептидной связи. Nat Struct Mol Biol, 13 (12): 1069–1077

    PubMed CAS Статья Google Scholar

  • Song Y, Madahar V, Liao J (2011).Развитие FRET-анализа в платформы для количественного и высокопроизводительного скрининга белок-белковых взаимодействий. Энн Биомед Энг, 39 (4): 1224–1234

    PubMed Статья Google Scholar

  • Стеффан Дж. С., Агравал Н., Паллос Дж., Рокабранд Е., Тротман Л. К., Слепко Н., Илес К., Лукачович Т., Чжу И. З., Каттанео Е., Пандольфи П. П., Томпсон Л. М., Марш Дж. Л. (2004). SUMO-модификация патологии Хантингтина и болезни Хантингтона.Наука, 304 (5667): 100–104

    PubMed CAS Статья Google Scholar

  • Страйер Л. (1978). Перенос энергии флуоресценции как спектроскопическая линейка. Анну Рев Биохим, 47 (1): 819–846

    PubMed CAS Статья Google Scholar

  • Страйер Л. Р. Х., Хаугланд Р. П. (1967). Передача энергии: спектроскопическая линейка. Proc Natl Acad Sci USA, 58 (2): 719–726

    PubMed CAS Статья Google Scholar

  • Suzuki Y (2000 г.).Обнаружение колебаний плеча миозинового двигателя путем резонансного переноса энергии флуоресценции зеленых и синих флуоресцентных белков. Методы, 22 (4): 355–363

    PubMed CAS Статья Google Scholar

  • Szöllosi J, Nagy P, Sebestyén Z, Damjanovicha S, Park JW, Mátyus L (2002). Применение флуоресцентного резонансного переноса энергии для картирования биологических мембран. Rev Mol Biotechnol, 82: 251–266

    Статья Google Scholar

  • Татхам М. Х., Ким С., Ю Б., Джафрей Е., Сон Дж., Чжэн Дж., Родригес М. С., Хэй Р. Т., Чен И. (2003).Роль N-концевого сайта Ubc9 в связывании и конъюгации SUMO-1, -2 и -3. Биохимия, 42 (33): 9959–9969

    PubMed CAS Статья Google Scholar

  • Трон Л., Сёллоши Дж., Дамьянович С., Хеллиуэлл С. Х., Арндт-Йовин Д. Дж., Джовин Т. М. (1984). Проточно-цитометрическое измерение FRET на поверхности клеток. Biophys J, 45: 939–946

    PubMed CAS Статья Google Scholar

  • Цудзи А., Кошимото Х., Сато Й., Хирано М., Сэй-Иида Й, Кондо С., Ишибаши К. (2000).Прямое наблюдение специфической матричной РНК в одной живой клетке под флуоресцентным микроскопом. Biophys J, 78 (6): 3260–3274

    PubMed CAS Статья Google Scholar

  • Валентин Г., Верхегген С., Пиолот Т., Нил Г., Коппи-Мойзан М., Бертран Е. (2005). Фотопреобразование YFP ​​в CFP-подобные частицы во время экспериментов по фотообесцвечиванию акцепторов FRET. Nat Methods, 2: 801

    PubMed CAS Статья Google Scholar

  • Ван Мюнстер Е. Б., Кремерс Дж. Дж., Аджобо-Херманс М. Дж., Гаделла Т. В. мл. (2005).Измерение резонансного переноса энергии флуоресценции (FRET) путем постепенного фотообесцвечивания акцептора. J Microsc, 218: 253–262

    PubMed Статья Google Scholar

  • Вервир П. Дж., Воутерс Ф. С., Рейнольдс А. Р., Бастиаенс П. И. (2000). Количественная визуализация распространения сигнала латерального рецептора ErbB1 в плазматической мембране. Наука, 290 (5496): 1567–1570

    PubMed CAS Статья Google Scholar

  • Виктор Руис-Веласко С. Р. I (2001).Функциональная экспрессия и анализ FRET GFP, слитого с субъединицами G-белка в симптоматических нейронах крыс. J Physiol, 537 (3): 679–692

    Статья Google Scholar

  • Wallrabe H, Periasamy A (2005). Визуализация белковых молекул с помощью микроскопии FRET и FLIM. Curr Opin Biotechnol, 16 (1): 19–27

    PubMed CAS Статья Google Scholar

  • Yeh E T H (2009).SUMOylation и De-SUMOylation: борьба с жизненными процессами. J Biol Chem, 284 (13): 8223–8227

    PubMed CAS Статья Google Scholar

  • Новая тенденция к определению биохимических параметров с помощью количественного анализа FRET

    Мартин и его коллеги были первыми, кто попытался измерить константу диссоциации взаимодействия белков с использованием биохимического подхода 21 . В частности, они провели эксперимент in vitro при фиксированной концентрации донора, CFP-SUMO1, с увеличивающимся количеством акцептора, YFP-Ubc9, для получения титрованных сигналов.Были определены как стационарные кривые связывания в сигнале FRET, так и в концентрации белка. Чтобы исключить загрязнение сигнала от прямого излучения донора и акцептора, они установили кривые внешнего стандарта для смесей только флуоресцентных белков или флуоресцентных белков только с одним взаимодействующим партнером. Хотя этот подход прост по идее, он требует множества экспериментов для корректировки прямого излучения донора и акцептора и, следовательно, утомителен. Поскольку флуоресцентные белки, использованные для определения стандартной кривой, отличались от тех, которые использовались при измерении K d , спектры чистоты и флуоресцентного излучения могут отличаться в зависимости от эксперимента.

    Перекрестные помехи в спектре между донором и акцептором — серьезная проблема для количественного анализа FRET. Спектр излучения донора может перекрываться со спектром излучения акцептора, и акцептор также может быть непосредственно возбужден на длине волны возбуждения донора. На протяжении многих лет многие экспериментальные попытки пытались обойти эти проблемы. Например, флуорофоры, демонстрирующие большой стоксов сдвиг, такие как квантовые точки, использовались для уменьшения перекрестных помех 22,23,24 .В качестве альтернативы, анализы FRET с временным разрешением с флуорофорами, которые демонстрируют длительный период полураспада, такими как красители на основе тербия, доказали свою эффективность в устранении мешающей флуоресценции от нежелательных источников 25,26,27 . Хотя эти методы значительно уменьшают перекрестные помехи спектра в анализе FRET и упрощают анализ сигнала FRET, необходимы более общие подходы, когда используются флуорофоры со значительными перекрестными помехами спектра, например, для внутриклеточно экспрессируемых рекомбинантных белков, меченных флуоресцентными белками.

    Наша группа разработала метод математического анализа перекрестных помех спектра между донором и акцептором FRET 28 . Этот метод основан на системе FRET флуоресцентных белков CyPet и YPet, пары, которая была специально оптимизирована для повышения эффективности FRET, чем у традиционных пар флуоресцентных белков, используемых в исследованиях FRET, таких как ECFP / EYFP 29 . CyPet и YPet имеют длины волн пиков возбуждения / излучения 414 нм / 475 нм и 515 нм / 530 нм соответственно.Когда CyPet и YPet конъюгированы с двумя взаимодействующими молекулами и смесь возбуждается на длине волны 414 нм, взаимодействие подавляет эмиссию CyPet на длине волны 475 нм и увеличивает эмиссию YPet на длине волны 530 нм. Однако интенсивность излучения при 530 нм не коррелирует линейно с YPet, возбужденным FRET, потому что CyPet имеет значительную эмиссию на 530 нм при возбуждении на 414 нм, а YPet может напрямую возбуждаться на 414 нм и излучать на 530 нм, независимо от FRET. . Для количественного анализа сигнала FRET необходимо определить излучение FRET YPet и устранить помехи от прямого излучения незагашенного CyPet и общего YPet.С этой целью мы ввели вторую длину волны возбуждения 475 нм, при которой возбуждается только YPet, но не CyPet (Рисунок 1).

    Рисунок 1

    Количественный анализ сигналов флуоресценции излучения FRET. Флуоресцентное излучение при длине волны 530 нм при длине волны возбуждения 414 нм (FL DA ) можно разделить на три компонента: излучение FRET от YPet-Ubc9, прямое излучение непогашенного CyPet-SUMO1 и прямое излучение YPet-Ubc9. Флуоресцентное излучение при 530 нм при длине волны возбуждения 475 нм (FLAA) состоит из прямого излучения YPet-Ubc9.

    Слайд PowerPoint

    Для определения компонентов прямой эмиссии определены два ратиометрических фактора поперечных длин волн: отношение эмиссии CyPet на 475 нм и 530 нм при возбуждении на 414 нм и отношение эмиссии YPet на 530 нм при возбуждении на 414 нм и 475 нм. Поскольку эти факторы являются константами для данного донора и акцептора FRET и конкретной установки визуализации, они могут быть определены с использованием очищенных белков CyPet или YPet.С этими факторами прямая эмиссия непогашенного CyPet на длине волны 530 нм может быть рассчитана на основе эмиссии на 475 нм при возбуждении на длине волны 414 нм, а прямая эмиссия YPet на длине волны 530 нм может быть рассчитана на основе интенсивности эмиссии на 530 нм при возбуждении на длине волны 414 нм. 475 нм. Затем можно определить интенсивность излучения FRET CyPet на длине волны 530 нм при возбуждении на длине волны 414 нм путем вычитания интенсивности направленного излучения из общего излучения и использовать его в последующих анализах.

    Универсальный метод кросс-волновой коэффективности, который мы разработали для количественного анализа сигналов FRET, можно применять во многих приложениях FRET, для которых спектры доноров и акцепторов существенно перекрываются.В этом анализе длина волны излучения, на которой излучает только донор, используется для расчета излучения донора на длине волны излучения акцептора, а вторая длина волны возбуждения, на которой излучает только акцептор, используется для расчета излучения в направлении акцептора. Для случаев, когда эти условия не могут быть выполнены, Чен и др. разработали аналогичный метод количественного анализа излучения FRET 18 . При их анализе используются три фильтрующие трубки для сбора флуоресцентных изображений излучения донора на длине волны возбуждения донора, излучения акцептора на длине волны возбуждения донора и излучения акцептора на длине волны возбуждения акцептора.Эти интенсивности флуоресценции затем выражаются как функции четырех параметров перекрестных помех и трех компонентов флуоресценции: флуоресценции донора, эмиссии FRET сенсибилизированного акцептора и прямой эмиссии акцептора. Параметры перекрестных помех могут быть определены из образцов, содержащих только донор или акцептор, а три компонента флуоресценции могут быть рассчитаны с помощью группы линейных уравнений с тремя переменными.

    K d является важным параметром для количественной оценки аффинности связывания белок-белковых взаимодействий.Традиционные методы измерения K d включают поверхностный плазмонный резонанс (SPR) и калориметрию изотермического титрования (ITC). По сравнению с этими методами измерение K d на основе FRET не требует специальных инструментов и может применяться в сложных биологических средах. Используя CFP и YFP в качестве донора и акцептора FRET, Мартин и др. разработали основанный на FRET анализ для количественного определения константы диссоциации белков SUMO1-Ubc9 21 .В их анализе CFP и YFP были ковалентно конъюгированы с SUMO1 и Ubc9. Рекомбинантные слитые белки очищали и смешивали in vitro с . Затем их спектр флуоресценции сравнивали со спектрами невзаимодействующих контрольных пар флуоресцентных белков, чтобы определить сенсибилизированное излучение FRET от YFP. Интенсивности эмиссии FRET наносили на график в зависимости от концентраций YFP для расчета максимальной эмиссии FRET, которую затем использовали для преобразования интенсивности эмиссии FRET в концентрации связанного белка YFP-Ubc9.Наконец, концентрации связанного белка наносили на график относительно концентраций свободного белка для расчета значения K d . Этот метод эффективен, но требует использования контрольных белков и нескольких раундов подгонки исходных данных.

    Наша группа разработала новый анализ на основе FRET с новой математической формулой, которая коррелирует сигнал FRET с K d для количественного определения K d белок-белковых взаимодействий.В этом анализе CyPet и YPet конъюгировали с SUMO1 и Ubc9, соответственно, и слитые белки экспрессировали и очищали. Различные концентрации YPet-Ubc9 титровали до фиксированной концентрации CyPet в 384-луночном планшете, и спектры флуоресценции при длинах волн возбуждения 414 нм или 475 нм измеряли с помощью считывающего устройства для флуоресцентных планшетов. Сенсибилизированное FRET излучение YPet-Ubc9 было проанализировано с использованием метода, который мы описали ранее 28 . Мы выразили эмиссию FRET YPet-Ubc9 как функцию максимальной эмиссии FRET, K d и концентрации свободного YPet-Ubc9.Поскольку концентрация свободного YPet-Ubc9 также может быть выражена как функция от K d на основе определения K d , формула была окончательно преобразована в следующую версию:

    Здесь X представляет собой концентрация общего YPet-Ubc9 в каждой точке данных, a представляет концентрацию общего CyPet-SUMO1, а Em FRET и Em FRETmax представляют интенсивность сенсибилизированного излучения FRET при экспериментальной и теоретической максимальной концентрации связанного YPet- Ubc9 соответственно.Поскольку a является константой в нашем анализе, FRET-сенсибилизированная эмиссия YPet-Ubc9 может быть адаптирована к концентрации YPet-Ubc9, чтобы получить значение K d за один этап (рис. 2). Мы использовали этот метод для определения K d SUMO1 и Ubc9 для различных концентраций CyPet-SUMO1 и получили согласованные результаты. Мы также определили K d между CyPet-SUMO1 и YPet-Ubc9, а также немаркированные SUMO1 и Ubc9 с помощью SPR.Затем мы сравнили эти значения K d со значениями, полученными из ранее задокументированного анализа ITC 30 (таблица 1). Конъюгация CyPet и YPet существенно не изменяет K d между SUMO1 и Ubc9, а анализ измерения K d на основе FRET дает результаты, сравнимые с результатами, полученными с использованием традиционных методов. Таким образом, наш анализ представляет собой точный метод измерения K d белок-белковых взаимодействий.Кроме того, наш анализ на основе FRET можно проводить в формате 384-луночного планшета, что делает его подходящим для высокопроизводительных приложений.

    Рисунок 2

    K d определение методом FRET. Эмиссию FRET YPet-Ubc9 сравнивали с концентрацией белка для получения K d CyPet-SUMO1 и YPet-Ubc9 за один этап.

    Слайд PowerPoint

    Таблица 1 Сравнение K d результатов анализа на основе FRET и традиционных методов.

    fret.si — Профиль первого инвестиционного фонда недвижимости

    Ценообразование

    Объем

    Предыдущее закрытие

    0,25

    Открытие

    0,24

    3M AVG Volume

    150.90

    Сегодняшний максимум

    0,24

    Сегодняшний минимум

    0.24

    Максимум за 52 недели

    0,80

    Низкий за 52 недели

    0,20

    Выход на рынок (MIL)

    1,608,76
    384,42

    Форвардная P / E

    Дивиденды (% доходности)