Лада x код: LADA XCODE Concept 2021: обзор, фото, новости

Опубликовано автором

Содержание

Чем порадует АвтоВАЗ в 2020 году — Российская газета

В 2019 году российский бренд Lada расширил модельный ряд за счёт «заряженного» седана Vesta Sport, «вседорожного» универсала Granta Cross, «околоспортивной» Granta Drive Active и «автоматических» Xray Cross и семейства Vesta.

Дальше перед Волжским автогигантом стоят задачи по выпуску новых и обновлению текущих моделей Lada. Примечательно, что для разработки новых продуктов завод активно набирает инженеров-технологов, конструкторов и дизайнеров.

Ждать в текущем году выхода принципиально новых моделей Lada не стоит. Ведь в августе, по уже сложившейся традиции, марка завалит Московский автосалон своими премьерами.

Наверняка завод покажет серийную версию Niva, он же кроссовер повышенной проходимости, а также компактный городской SUV по мотивам XCode, «каблучок» с рабочим названием Van, концепт бюджетника Granta второго поколения, рестайлинговые Vesta FL и Xray FL. Выход новинок растянется на последующие два года, но пока спустимся с небес на землю, а именно в реалии 2020 года.

1. Lada 4×4 FL — обновление самой старой модели

В середине декабря 2019 года АвтоВАЗ запустил серийное производство обновлённой Lada 4×4 с заводским обозначением FL (Facelift). Первые товарные экземпляры модернизированной модели активно отгружают в дилерскую сеть, продажи должны стартовать в текущем месяце.

После обновления снаружи обычную Lada 4×4 с алюминиевыми бамперами можно идентифицировать только по наличию штатной антенны на крыше. Классические «нивовские» бампера останутся на некоторых версиях. Lada 4×4 в городской модификации Urban отличается передним бампером с интегрированными противотуманными фонарями. Также установлены новые опоры силового агрегата (снижающие уровень вибраций), улучшенный пакет шумо-виброизоляции на панелях кузова, ограничители и трёхкамерные уплотнители дверей.

Главное — Lada 4×4 FL получила новый интерьер. В салоне появилась оригинальная передняя панель с электронным блоком управления климатической установкой, увеличенными воздуховодами, вместительным бардачком, комбинацией приборов от Lada Priora (по стилистике схожа с Granta FL, Vesta, Xray). Внедорожник оснащается более удобными сиденьями с развитой боковой поддержкой и широким задним диваном с двумя подголовниками. Передние кресла имеют модернизированный механизм складывания и могут подогреваться, а водительское сиденье обзавелось боковой подушкой безопасности.

Наконец, внутреннее убранство может похвастать формованным потолком с солнцезащитными козырьками, плафоном освещения и блоком системы ЭРА-ГЛОНАСС, а также новой обивкой стоек лобового стекла, потолочными поручнями. Изменился и центральный тоннель, в котором присутствует ниша под смартфон, две розетки на 12В, подстаканники, блок электрической регулировки боковых зеркал, кнопки стеклоподъёмников и обогрева сидений.

По технике Lada 4×4 по-прежнему оснащается 1,7-литровым бензиновым двигателем мощностью 83 л.с. и пятиступенчатой механической коробкой передач.

Отметим, модернизация Lada 4х4 проходит в два этапа. Первый осуществлён, второй случится в нынешнем году. В рамках дальнейшего рестайлинга внедорожник должен обзавестись оригинальным рулевым колесом с подушкой безопасности (!), другой облицовкой рулевой колонки, дверными картами нового образца, более эргономичными рычагами управления коробкой передач, «блокировкой-понижайкой». Дело в том, что на момент премьеры обновлённого внедорожника у завода не хватило денег на установку той же фронтальной водительской подушки, а машину в производство надо было запускать.

Не исключено, что в комплексную модернизацию Lada 4×4 войдут и следующие предполагаемые доработки: автоматическое включение дворников при включении омывателя, замена самих форсунок, программируемая пауза работы стеклоочистителей, выключение ближнего света и габаритов при выключении зажигания. Инженеры намерены внедрить подлокотник сиденья водителя, фильтр для поступающего в салон воздуха, а также адаптировать обивки передних дверей для установки акустических динамиков, уменьшить загрязняемость ручки двери багажника, а цвет полки багажника приблизить к основному цвету отделки салона.

Надеяться на существенные улучшения по части техники не приходится. Хотя в своё время планировалось установить под капот Lada 4×4 1,6-литровый «атмосферник» и оснастить кнопкой электроблокировки дифференциала.

Объем нововведений зависит от финансовых успехов АвтоВАЗа. Завод действительно хочет улучшить легендарный внедорожник по многим параметрам, но серьёзное вмешательство в конструкцию машины советской разработки приведёт к удорожанию машины, а это неминуемо разрушит её рыночное преимущество.

Впрочем, времени у предприятия предостаточно, срок производства классической Lada 4×4 (Нива) продлен вплоть до 2026 года, когда модели исполнится 49 лет.

2. Largus FL — фейслифт лицензионной модели

Ещё одна модель, давно требующая к себе внимания — универсал Lada Largus. В линейке бренда Lada автомобиль появился в 2012 году и является лицензионной копией Dacia Logan MCV первого поколения 2006 года (!), адаптированной под российские условия. Доподлинно известно, что АвтоВАЗ активно работает над проектом фейслифта Lada Largus.

Изначально появление Largus FL ожидали к осени 2019 года, но в прошлом году было проведено лишь легкое обновление универсала, в рамках которого Largus получил решетку радиатора с двумя тонкими ламелями в новой стилистике марки.

Помимо этого, модель теперь имеет эмблему «ладьи» нового образца на решетке радиатора и ступице рулевого колеса, а также новый шильдик Lada (с большим расстоянием между буквами) на левой дверце багажника. Появились такие мелочи, как функция отключения головной светотехники при выключении зажигания, черное покрытие центральной стойки кузова, усиленная тонировка задней полусферы остекления, новая ткань обивки сидений.

Коммерческая модель Lada Largus показывает хороший уровень спроса и соответственно стабильные продажи. Поэтому завод не торопится с глубоким рестайлингом, который в итоге запланирован на 2020-2021 годы. Важным требованием Largus FL является то, что по стоимости он должен остаться в той же нише.

Универсал примерит новую переднюю часть кузова в Х-стиле, отражающую принадлежность к Lada Vesta, Xray и Granta FL. Появятся другие бамперы, иная оптика, решетка радиатора, возможно, изменится форма капота и передних боковых крыльев. Сбоку автомобиль должен остаться прежним. Ожидается, что после фейслифта автомобиль получит обновленный или полностью новый салон.

По технической части изменения вероятны. В прошлые годы звучали обещания начать оснащать Lada Largus 1,8-литровым двигателем (122 л.с.) с индексом ВАЗ-21179 и автоматической трансмиссией. По нашим данным, АвтоВАЗ задумывается над установкой на Lada Largus 122-сильного мотора, тем более, что ещё на стадии разработки агрегат рассчитывался для внедрения на Lada Vesta, Xray, непосредственно Largus и «Ниву» нового поколения. В качестве «бюджетной» альтернативы «автомата» тольяттинский автогигант может рассмотреть автоматизированную механическую трансмиссию («робот»). Подобный опыт уже испробован на соплатформенном Xray.

Кстати говоря, с момента выхода из всех агрегатных нововведений универсал удостоился лишь замены «реношных» двигателей на «вазовские». С октября 2017 года АвтоВАЗ начал продажи Lada Largus с 16-клапанным двигателем ВАЗ-21129.

106-сильный «атмосферник» вытеснил из гаммы мотор Renault K4M. В 2016-м завод заменил 84-сильный Renault K7M на ВАЗ-11189 мощностью 87 л.с. В Одобрении типа транспортного средства (ОТТС) за 2018 год в Lada Largus были зафиксированы изменения в виде установки 5-ступенчатой механической коробки передач с индексом ВАЗ-21809.

3. Vesta SW Sport — в погоне за седаном

Фото: Валерий Карташов/ РГ

Почти год назад, 31 января 2019 года, начались продажи седана Lada Vesta Sport. Модель стала самой дорогой серийной Lada в истории, но возможно это звание является временным. Давно сертифицирован универсал Vesta SW Sport, судьба которого напрямую зависит от успеха продаж спорт-седана.

Несмотря на наличие ОТТС и прототипов, компания находится в поиске рентабельной концепции для рынка. Всё зависит от окупаемости проекта, вложенных инвестиций и объёмов выпуска.

Известно, что проект Vesta SW Sport не закрыт и машина всё-таки увидит свет. Только в период с 31 января по 1 марта прошлого года официальные дилеры марки реализовали 217 экземпляров Vesta Sport (при годовом объёме в 1200 штук). Да, нужно дождаться итоговых цифр продаж седана за год. Но есть ощущение, что весь запланированный на 2019 год тираж Vesta Sport в большей степени реализован.

К тому же, степень унификации обвеса между двумя Sport-версиями составляет 100%, а значит завод не понесёт больших затрат на вывод перспективной новинки.

Так что вполне можно ждать «заряженного» универсала Vesta SW, которую множество количество раз замечали на дорожных тестах. Модель создаст вокруг себя новый класс автомобилей в бюджетном В-сегменте. По внешнему виду и доработкам шасси Vesta SW Sport полностью идентична Vesta Sedan Sport, с поправкой на тип кузова.

В остальном спорт-универсал будет схож со спорт-седаном и получит спортивный аэродинамический обвес, расширенную колею с передними пластиковыми крыльями, оригинальные 17-дюймовые диски на пяти болтах. В шасси появятся новые амортизаторы и стойки, тормоза с дисками увеличенного диаметра, заниженная подвеска с клиренсом в 162 мм.

В салоне установят новые сиденья с развитой боковой поддержкой, обновленную комбинацию приборов, черный потолок, атмосферную LED-подсветку, декоративные элементы под «карбон», накладки на педалях и порогах. Рулевое колесо, рукоятка коробки передач, ручник и подлокотник будут отделаны кожей.

Как и седан Vesta Sport, универсал Vesta SW Sport оснастят 1,8-литровым двигателем, мощностью 145 л.с. и крутящим моментом 187 Нм. Доработанный мотор отличается новыми распредвалами с измененным профилем (увеличен подъем кулачков), повышенным давлением в топливной системе и оригинальной калибровкой контроллера. Силовой агрегатируется с 5-ступенчатой механической коробкой передач JR5. Максимальная скорость спорт-седана составляет 198 км/ч, время разгона до 100 км/ч — 9,6 секунды.

Стоит напомнить, ещё в 2017 году АвтоВАЗ зарегистрировал новые товарные знаки — Vesta S-Line и Vesta R.

По аналогии с другими автомобильными компаниями можно предположить, что под приставкой S-Line завод «скрывает» «лайтовую» версию Vesta Sport в агрессивном обвесе, с той же спортивной подвеской, но без форсированного мотора.

С Vesta R дилемма. Vesta Sport оснащается 145-сильным двигателем, тогда приставку R должна получить самая мощная модификация Vesta. По слухам, рассматривается «форсировка» 1,8-литрового мотора до 180 л.с и установка турбомотора от Альянса Renault-Nissan-Mitsubishi серии H5Ht 1.3 TCe 150. К слову, обычно литера «R» в названиях моделей подразумевает и установку нового обвеса, а также глубокую перенастройку иных узлов, вроде подвески, трансмиссии и др.

4. Vesta FL — рестайлинг флагмана

25 ноября 2019 года стартовали продажи Lada Vesta с долгожданной связкой бесступенчатой автоматической трансмиссией Jatco JF015E и двигателем Renault h5Mk объемом 1,6 литра (113 л.с.). Некое промежуточное обновление случилось спустя ровно четыре года после начала продаж модели.

За это время семейство Vesta успело пополниться седаном, универсалом, их кросс-версиями, модификациями с приставкой CNG и Sport. Lada Vesta получила ряд опций и доработок, было устранено большинство «детских болячек», вроде посторонних звуков в подвеске, а также установлен новый стабилизатор, новые ограничители дверей и многое другое.

С появлением новой модификации Lada Vesta AT впервые в истории бренда Lada стал применяться электропривод складывания зеркал. Появились обогрев рулевого колеса, бескаркасные щетки стеклоочистителя, более глубокие подстаканники, чёрный потолок, функция подсветки поворотов и атмосферная подсветка салона, обычные седаны теперь оснащаются антенной «акулий плавник» и задним диваном со встроенным подлокотником. Цветовая гамма семейства пополнилась долгожданной сине-голубой эмалью «Дайвинг» и свежим черным цветом «Маэстро».

На этом АвтоВАЗ не собирается останавливаться. К 5-летнему юбилею Vesta необходимо кардинальным образом подготовить. Обновить внешность, изменить салон и поставить резвый мотор.

Всё это может исполниться уже в конце 2020 года или в начале 2021 года. «Российская газета» склоняется к текущему году и датам 25 сентября (дата серийного производства) или 25 ноября (дата старта продаж), когда модели исполнится пять лет и пора будет устроить полноценный рестайлинг.

Lada Vesta с заводским обозначением Facelift получит обновлённый дизайн экстерьера и абсолютно новый интерьер. Под капотом прогнозируется появление вышеописанного 1,3-литрового турбомотора (150 л.с.) от Renault Arkana.

Предполагается, что у Lada Vesta FL появятся новые бампера, фары и фонари, решетка радиатора, крышка багажника иной формы, при этом боковая часть кузова останется прежней. Машину оснастят обновлённым блоком управления стеклоподъёмниками с авторежимом, а форсунки стеклоомывателя «переедут» с капота на «жабо» автомобиля.

В рамках фейслифта Lada Vesta обзаведется полностью оригинальной передней панелью с современной архитектурой, дверными картами и центральным тоннелем пола. Особенностью интерьера станет огромный «парящий» тачскрин мультимедийной системы, который объединен с блоком климатической установки. В нижней части центральной консоли будет предусмотрена большая ниша для смартфона (станет доступна опция беспроводной зарядки).

Изменится дизайн селектора механической коробки передач, возле закрытой секции с подстаканниками (как на автомобилях классом выше) будет кнопка электронного ручника и шайба-селектора выбора режима движения Lada Ride Select. Сиденья останутся прежними, но в них должен поменяться угол наклона подушки, подлокотник станет регулируемым, рулевое колесо сменит дизайн и станет меньшего диаметра, на панели будет доступна кнопка «старт-стоп», в комбинации приборов будет отображаться два колодца и большой дисплей бортового компьютера.

Поменяется также форма воздуховодов, ручек открывания дверей и декоративных элементов, в боковинах центрального тоннеля появятся кармашки для мелочёвки.

Марка Лада поманила россыпью концептуальных паркетников — ДРАЙВ

По словам главного дизайнера компании Стива Маттина, концепты, подготовленные к салону, — новый шаг в стилистике, заданной седаном Lada Vesta или «икс-реем». И действительно, фирменных букв «X» явно прибавилось.

Самый большой стенд на Московском автошоу за всю историю бренда Лада вместил 19 автомобилей, шесть из них — концепты (пять новых). Главный магнит экспозиции, конечно, Xcode. Вспоминается неофициальная информация о ещё только обсуждаемой идее создания оригинального паркетника в размерах Калины. Ну а пока эта машина объявлена просто предвидением облика будущих Лад.

Решётка радиатора с иксом дополнена светодиодными икс-фарами, фонари тоже образуют букву «икс», и даже традиционные выштамповки по бортам сделаны более рельефными. Модная парящая крыша сзади визуально отделена от стойки чёрной вставкой.

Салон «икс-кода» не похож на интерьер нынешних Лад. Десятидюймовый экран мультимедийной системы открывает доступ к облачным сервисам Lada Cloud.

Авторы концепта не раскрывают технических данных, но указывают, что конструкция принципиально предусматривает установку турбомотора и полного привода. О серии для «икс-кода» говорить рано, хотя, по инсайдерской информации, это может быть 2018-19 год. Зато единственный концепт на автошоу, показанный публике ранее, универсал Vesta Cross, встанет на конвейер во второй половине 2017-го. Его на стенде поддержали модели Xray Cross и Vesta Cross Sedan.

Седан Vesta Cross с увеличенным до 20 см клиренсом оформлен аналогично кроссу-универсалу.

Возможно, скоро у Volvo S60 Cross Country появится российский аналог, пусть и в другом сегменте.

Вспомним, что пятидверка Xray когда-то начинала свою карьеру как неординарный концептуальный паркетник с тремя створками, потом проект упростился до шоу-кара номер два, а в итоге обратился хэтчбеком (хотя на сайте компании его числят кроссовером). Сейчас трансформация этой машины завершила своеобразный цикл.

Концепт Xray Cross получил 17-дюймовые колёса, увеличенный клиренс и пластиковый обвес в стиле кросс-Весты.

У кроссового варианта пятидверки Xray такие же хорошие серийные перспективы, как и у приподнятой Весты, хотя ещё пару-тройку лет покупателям нужно будет подождать. Даже внедрение полного привода тут обсуждается, хотя неясно пока, по какому пути лучше пойти: адаптировать механическую трансмиссию альянса (с муфтой в приводе задней оси, как у Дастера) или поставить гидрообъёмную систему, с гидромоторами сзади и масляным насосом в коробке передач.

Ещё Веста и Xray предстали перед зрителями в противоположном амплуа. Два концепта Vesta Sport и Xray Sport стараниями Маттина и его команды обзавелись новыми бамперами, креслами, яркими акцентами в салоне, спойлерами и прочими атрибутами «подогретых» модификаций.

Спортивные вариации двух этих же машин объявлены потенциальным направлением развития линейки марки. Шоу-кары получили 18-дюймовые колёсные диски, спортивные настройки моторов и подвесок, задние дисковые тормозные механизмы и кучу ярких акцентов в дизайне. Были в столице представлены и Лады куда более близкие к конвейеру.

Седан Vesta Signature удлинён на 20 см против стандартной версии, вся прибавка пошла на пространство на втором ряду, где вместо дивана появились два кресла.

Замеченная недавно фотошпионами длиннобазная Vesta превратилась в модификацию Signature, которую компания намерена выпускать под заказ.

При этом в широких пределах может варьироваться оформление интерьера (цвета, материалы), по желанию клиента завод поставит продвинутую развлекательную систему. Даже автоматизированная трансмиссия тут перекалибрована в сторону более плавной работы. Не менее важно, что шумоизоляция в таком седане была усилена.

В Весте Signature появилась кожаная отделка с перфорацией, вставки под чёрный лак, текстильные коврики, оригинальные декоративные элементы вроде окантовок воздуховодов. В салон каждого седана будет помещена металлизированная табличка с автографом владельца.

Президент ОАО АвтоВАЗ Николя Мор выразил уверенность, что расширение модельного ряда поможет марке отвоевать новые сегменты рынка. А ведь и сейчас дела у бренда Лада обстоят неплохо. За первые семь месяцев 2016 года наблюдалось падение продаж на 10% при общем снижении рынка на 14,4%. Доля Лады возросла за год на процент (до 18,7%, по данным Ассоциации европейского бизнеса).

Лада Х-КОД — фото, цена концепта, технические характеристики и видео

Краткое содержание статьи:

Август 2016 года ознаменовался премьерой от российского автомобильного производителя. 24 числа на Московском международном автосалоне на суд зрителей была представлена концептуальная модель кара Lada XСode, построенная за несколько месяцев (наброски были выполнены в январе того же года). Дизайн и интерьер машины не разочаровал автолюбителей, пришедших в выставочный центр Крокус-экспо, где и проходило мероприятие. В данной статье следует рассмотреть все то, что интересует потенциальных покупателей кара Лада Х-Код – фото, цены, технические особенности авто и дату его появления на рынке.

Дизайн машины

Дизайн новинки имеет некую схожесть с первым концептом Лады Х Рэй 2012 года (у этой же модели XСode перенял и конструкцию кузова на три двери). При этом экстерьер представленной на прошлогоднем автосалоне машины отличается от экстерьера предшественника двухцветной окраской (крыша авто и его корпус отличаются по цвету) и более «агрессивным» внешним видом.

Ультрасовременные пропорции, компактные свесы, обтекаемый профиль и высокая подоконная линия создают неповторимый образ концептуального автомобиля Лады Икс Код. Машина отличается особой оригинальностью и выразительным стилем, который подчеркивает ее «хищный» характер.      

Свойственные модели икс-образные формы прослеживаются не только в радиаторной решетке, но и в алюминиевых деталях переднего бампера. Фары, продолжающие решетку радиатора, визуально расширяют Ладу. Фонари в задней части кара также перекликаются с «иксами» и представляют собой продолжение стойки, которая изготовлена в форме «акулий плавник». Боковые элементы кузова выделяются благодаря добавленному объему.

Многих автолюбителей приятно удивило решение спрятать ручки задних дверей. Разработчикам удалось скрыть ручки, находящиеся с наружной стороны, перенеся их в область дверной рамки черного цвета.

Передние боковые стойки, продольные боковые балки и задний спойлер окрашены в белый цвет (оттенок «керамика»). Все эти части машины заметно контрастируют с черным глянцем крыши и насыщенным желтым кузовом.

Последним штрихом, завершающим яркий дизайн концепта, является эффектный задний бампер. 

Салон

Внешне компактное авто обладает достаточно просторным и комфортабельным салоном, который способен вместить пять человек (включая водителя). В каждом из двух рядов сидений достаточно свободного пространства, как для ног, так и для головы.

Дизайн салона данной концептуальной модели существенно отличается от остальных новинок компании АвтоВАЗ. Основное его преимущество – технологичность. В салоне присутствует полноцветная приборная панель, оснащенная качественным информативным дисплеем. Диагональ мультимедийного сенсорного дисплея – десять дюймов.

На панели управления находится современное головное устройство, осуществляющим множество функций, среди которых система навигации, синхронизация с гаджетами, доступ во «всемирную паутину» и т.д.

Двухцветные сидения машины схожи с сидениями спортивных автомобилей.

Комплектации и технические качества

Серийная модель Х-Код продолжает разрабатываться, поэтому ее технические характеристики и комплектации обсуждать еще рано.

Даже после презентации вопрос выбора платформы для автомобиля решен не был. Вероятно, серийная машина будет сочетать в себе структуру кузова Lada Kalina и подвеску, двигатель и рулевое управление Lada Vesta.

Эксключзивное видео от БТД:

Авто будет относиться к классу компактных кроссоверов. Производители уверяют, что автомобилисты получат два в одном – авто и с передним приводом, и с полным приводом (ставка делается на то, что новинка будет иметь полный привод, который будет подключаться автоматически).

Такие характеристики как мощность и объем двигателя остаются неизвестными, но сообщается, что в доступе будут атмосферные и турбированные моторы на бензине.

Также в оснащении машины предполагается наличие ряда опций, обеспечивающих безопасность вождения:

  • Автоматическое торможение перед возникающим препятствием;
  • Автоматическая парковка – перпендикулярная и параллельная;
  • Функция поддержания дистанции с находящимся впереди авто;
  • Управление машиной в дистанционном формате.

Достоверно известно, что машина в первую очередь рассчитывается на водителей нового поколения, поэтому она будет выполнена в соответствии с прогрессивными технологиями.    

Размерные характеристики кара отличаются от XRay, но близки к Калине. Длина представленного авто равна 4 метрам, колесная база – 2 с половиной метрам.

Автомобиль в основном рассчитан на езду по городу, невзирая на увеличенное расстояние между нижней точкой машины и поверхностью дороги. Благодаря увеличению размера колес и клиренса приумножается практичность модели. 

Следует напомнить, что Lada XСode – усовершенствованная версия автомобиля ХRay, который можно приобрести уже сейчас. Икс Рэй доступен в таких комплектациях:

 Lada XRay OptimaLada XRay AdvancedLada XRay LuxeLada XRay Top
Стоимость (р.)589 000669 000719 000829 000
Мощность (лошадиные силы)106122122122
Наибольшая скорость (км в час)176179179186
Расход горючего9.3 / 5.9 / 7.29.3 / 5.8 / 7.19.3 / 5.8 / 7.18.6 / 5.8 / 6.8
Кондиционер–+––
Климат-контроль––++
Легкосплавные диски–+++
Противотуманки (противотуманные фары)––++
Камера заднего вида–––+
Встроенная система навигации–––+

X Сode: дата начала продаж и стоимость

После поступления Лады Х-Код в продажу, производство линейки автомобилей «Калина» планируют прекратить. Это обусловлено тем, что компания считает нецелесообразным выпускать схожие по формату машины. По предварительным сведениям это произойдет уже скоро – массовое производство X Сode запланировано на конец 2018 года (Лада Х-Код 2017 – миф, созданный прессой). Представители АвтоВАЗа уверяют, что в 2019 году все желающие смогут обзавестись новинкой через официального дилера.

Данных о предполагаемой стоимости машины пока нет. Единственное, что точно известно – цена модели не будет превышать текущую стоимость Lada Kalina.   

Видео с презентации концепта:

Что ещё можно почитать:

LADA XRAY Cross – Технические характеристики – Первый Лада Центр, Краснодар.

  • Кузов

  • Колесная формула / ведущие…

  • Расположение двигателя

  • Тип кузова / количество…

  • Количество мест

  • Длина / ширина (по зеркалам) / высота по антенне,…

  • База, мм

  • Колея передних / задних колес,…

  • Дорожный просвет, мм

  • Объем багажного отделения в пассажирском / грузовом…

  • Двигатель

  • Код двигателя

  • Тип двигателя

  • Система питания

  • Количество, расположение…

  • Рабочий объем, куб. см

  • Максимальная мощность, кВт (л. с.) / об….

  • Максимальный крутящий момент, Нм / об….

  • Рекомендуемое топливо

  • Динамические характеристики

  • Максимальная скорость, км/ч

  • Время разгона 0-100 км/ч, с

  • Расход топлива

  • Городской цикл, л/100 км

  • Загородный цикл, л/100 км

  • Смешанный цикл, л/100 км

  • Масса

  • Снаряженная масса, кг

  • Технически допустимая максимальная масса,…

  • Максимальная масса прицепа без тормозной системы /…

  • Объем топливного бака, л

  • Трансмиссия

  • Тип трансмиссии

  • Передаточное число главной…

  • Подвеска

  • Передняя

  • Задняя

  • Рулевое управление

  • Рулевой механизм

  • Шины

  • Размерность

    • Warmoth Custom Guitar Parts — Размер ладов

    Warmoth предлагает широкий выбор размеров ладов и материалов для каждого игрока. Воспользуйтесь приведенной ниже информацией, чтобы выбрать лада, который лучше всего подходит для вас. Номера ладов Dunlop приведены только для справки. Фактические размеры ладов будут незначительно отличаться от партии к партии.

    Стандартная никелевая / серебряная проволока для ладов

    Это наша стандартная струна для ладов. Он изготовлен из тончайшего 18% твердого никеля / серебра, что обеспечивает долгий срок службы стальных струн.Состав этой ладовой проволоки, хотя и называется «никель / серебро», совсем не содержит серебра. В состав входят латунь и никель. Наш никелевый / серебряный лад имеет значение HV 170 по шкале твердости Виккерса.


    Номер позиции Ширина X Высота Описание используется
    6230 .080 «X .037» Самая маленькая лада Гриф Vintage Fender®
    6130 .106 «X .036» Низкий и широкий. Иногда называется «средний джамбо» Много грифов Gibson®
    6105 .095 «X .047» Узкий и высокий Очень популярный выбор
    6150 .104 «X .047» Широкий и высокий. Стандартный «Джамбо» Гриф Modern Fender American®
    6100 .118 «X .058» Очень большая проволока, почти зубчатая на ощупь Общий на шее Ibanez®

    Проволока для лада из нержавеющей стали

    Это наша проволока для ладов премиум-класса. Нержавеющая сталь тверже и гладче, чем никелевый / серебряный лад, предлагает превосходную долговечность и быстрое ощущение гладкости с незначительным влиянием на тон. Это делает его отличным выбором для тех, кто использует струны с круглой обмоткой, что, как известно, плохо играет на ладах. Наш высококачественный лобовый провод Jescar немецкого производства оценивается в HV 300 (+/- 20) по шкале твердости Виккерса.


    Номер позиции Ширина X Высота Описание Используется
    SS6230 .080 «X .037» Маленькое винтажное крыло размером Гриф Vintage Fender®
    SS6105 .095 «X .047» Узкий и высокий Самый популярный выбор
    SS6150 .104 «X .047» Стандартный «джамбо» размер Гриф Modern Fender American®
    SS6115 .108 дюймов x 0,051 дюйма Проволока «Джамбо» с большим пиком Уникальный для Warmoth
    SS6100 .118 «X .058» Очень большая проволока, почти зубчатая на ощупь Общий на шее Ibanez®

    Проволока для ладов золотого цвета

    Наш красивый золотой карабин — это медный сплав, не содержащий никеля, по цвету похожий на золото 12 карат.Эта высококачественная немецкая проволока Jescar EVO прочна и никогда не потемнеет. Он почти такой же твердый, как нержавеющая сталь, и прекрасно полируется, создавая сверхбыстрое ощущение стекла. Номинальное значение HV 250 (+/- 20) по шкале твердости Виккерса.

    ПРИМЕЧАНИЕ: Наша золотая проволока для ладов — гипоаллергенна из EVO для людей с аллергией на никель.


    Номер позиции Ширина X Высота Описание Используется
    GD6150 .104 «X .047» Стандартный размер «Джамбо» EVO Стиль Modern Fender®
    GD6100 .118 «X .058» Очень большая проволока, почти зубчатая на ощупь Стиль Ibanez®

    Выбор ладовой проволоки

    Выбор правильного размера и материала лада — дело личных предпочтений.В целом считается, что низкие лады лучше подходят для игры на аккордах и ритме, в то время как высокие лады облегчают сгибание струн и технику соло. 6105 и 6150 — два наших самых популярных размера ладов, которые представляют собой хороший баланс.

    Ширина лада определяет степень износа, который можно ожидать перед необходимостью выравнивания и повторной коронки. Более широкие лады изнашиваются дольше. Узкие лады изнашиваются быстрее. Для максимально длительного ношения и исключительно плавного изгиба струны без изменения тона рассмотрите лады из нержавеющей стали.Золотая проволока для ладов имеет уникальный внешний вид и к тому же гипоаллергенна.


    Хордовые схемы »Расширения

    Создание диаграмм аккордов для ладовых инструментов.
    Схемы аккордов вставляются как сгруппированные элементы рисования и, таким образом, впоследствии могут быть отредактированы.
    Поддерживает любое количество струн и ладов.

    Обратите внимание: Что-то не работает во всех версиях LibreOffice до 5.4.3 и все версии OpenOffice, которые я тестировал на Linux Mint и Ubuntu , что также нарушает некоторые интересные функции (импорт и применение стилей, редактирование существующих аккордов с помощью кнопки редактирования, экспорт изображений).
    Вот отчет об ошибке:
    https://bugs.documentfoundation.org/show_bug.cgi?id=113615

    Ошибка исправлена ​​в LO5.4.4! (Но SVG-экспорт не работает в упомянутых системах Linux)

    Панель инструментов имеет 4 кнопки:
    1. Chordinput
    Эта кнопка позволяет вставлять новые или заменять выбранные аккорды путем ввода.(LibreOffice: если у вас выделен отрывок текста, все слова станут ChordDiagrams. OpenOffice выйдет из строя).
    Введите название аккорда, например: c или cm
    Типы по умолчанию, помимо мажора: 5,7, m, m7, m7b5, maj7, sus4,7sus4, dim7
    Эти типы по умолчанию можно транспонировать с помощью расширения «ChordTransposer» https : //extensions.libreoffice.org/extensions/chordtransposer

    Другие типы: -scale и -scalefull.
    Для создания горизонтальных диаграмм введите «-«, например,
    -c-scalefull создаст горизонтальную диаграмму, показанную на скриншоте

    В качестве альтернативы вы также можете ввести Chord-Code e.грамм. C: x / 3/2/0/1/0
    Будет создан обычный аккорд C: C. Строки разделяются символом /. Итак, для 6 строк требуется 5/
    MainSyntax: Имя: Точки: Barrees: FretLabels
    Возможны 3 вида точек: По умолчанию — круг. Для квадрата добавьте s после числа, для ромба добавьте d после числа, например: C: x / 3d / 2s / 0/1/0

    Чтобы добавить текст в Dots, Barrees или FretLabels, введите:, text so: C: x / 3,3 / 2,2 / 0 / 1,1 / 0 добавляет текст в точки.
    Barrees добавляются с: B и Fretnumber, например: F: / 3/3/2 //: B1 — это стандартный F-аккорд
    Partial Barrees можно ввести, задав начальное и конечное значения Пример: Dm7: x / x / 0 / 2 //: B1 (2-1)
    Вы можете добавить FretLabels на любой лад с помощью: Lfretnumber, text e.грамм. : L1, yourtext
    Когда вы добавляете FretLabel к первому ладу, Nut будет удален. Таким образом, F-аккорд можно превратить в G-аккорд на 3-м ладу, только добавив FretLabel к первому ладу: G: / 3/3/2 //: B1: L1, III
    Больше точек на той же струне (для гамм) можно ввести с помощью — так будет создана сетка с 1 строкой и 3 точками:
    ScaleExample: 1-3-5
    Просто посмотрите на код, сгенерированный Chord-Editor

    2.Edit
    Эта кнопка позволяет вставлять или заменять выбранные аккорды путем редактирования в редакторе аккордов.Редактор поддерживает от 1 до 6 струн и от 1 до 12 ладов.
    Левая кнопка мыши добавит точки.
    Shift + щелчок удалит точки.
    Ctrl + Click изменит стиль точки: черный = круг, серый = квадрат, синий = ромб.
    Диаграмма результатов будет включать только заполненные лады или метки. Итак, если вы хотите показать 12 ладов, но есть только точки до 10-го лада, добавьте текст в 12-й лад, например, пустое место.
    Здесь вы также можете посмотреть автоматически сгенерированный аккордовый код. Код аккорда — это то, что создаст диаграмму.Вы можете отключить автоматический режим и добавить больше строк, если хотите.
    3.Style
    Эта кнопка позволяет вам установить предпочтения для новых хордовых диаграмм и изменить стиль выбранных хордовых диаграмм. (Настройка будет сохранена в пользовательских свойствах документа вашего документа). Для сброса просто удалите это свойство в Файл-> Документ-> Свойства-> Пользовательские свойства)
    Вы можете импортировать стили из выбранных аккордов и применять их к выбранным. Также доступен режим реального времени.

    Если вы хотите использовать музыкальные символы ♯ и ♭ вместо # и b, вы можете установить флажок «использовать ♯, ♭ в текстах».
    Кнопка вверху, называемая «Rebuild selection», предназначена для случаев, когда вы хотите применить другую структуру к уже существующим аккордам, например, минимальное количество показываемых ладов или ориентацию макета.
    4.Export
    Позволяет экспортировать выбранные аккорды в формат SVG или .png. (Или вы можете скопировать и вставить аккорд в Draw и экспортировать оттуда)

    Некоторые подсказки:
    — Для изменения масштаба диаграмм лучше всего использовать кнопку «Стиль». (Вы также можете напрямую изменить размер, перетаскивая углы вручную, а затем исправить размеры текста, импортировав, отредактировав и применив стиль.)
    — Привязка «AS Character» возможна, но не рекомендуется. («AS Character» не позволяет редактировать элементы вручную, как описано ниже 🙂
    — Каждую часть диаграммы также можно редактировать напрямую, введя группу или щелкнув ctrl-кнопкой. Чтобы отредактировать текст, дважды щелкните по нему. Для изменения цвета используйте навигатор. Для перемещения частей используйте клавиши со стрелками на клавиатуре, для небольших перемещений используйте клавиши alt + стрелки. В Windows несколько частей можно выбрать с помощью shift + ctrl-click
    — если вы хотите выбрать или изменить сразу несколько диаграмм аккордов, вы можете выбрать их, дважды щелкнув имя аккорда в навигаторе или выбрав одну диаграмму аккорда в документе. и сдвиг, щелкнув на больше.Или выберите одну хордовую диаграмму, а затем нажмите Shift + щелкните и перетащите, чтобы создать прямоугольник выделения. Вы также можете просто выбрать обычный текстовый диапазон. Тогда все диаграммы аккордов, закрепленные в этом диапазоне выбора, будут затронуты применением стиля.

    То же расширение для OpenOffice4:
    https://extensions.openoffice.org/de/node/18755

    ChordDiagrams является частью моего бесплатного проекта для LibreOffice и OpenOffice:
    LibreOfficeSongbookArchitect (LOSA)
    http: // strikekai. blogspot.de/2015/04/libreofficesongbookarchitect.html

    ре минор аккорд | Как играть на Dm Guitar Chord

    Основной аккорд в каталоге нот.

    Аккорд ре минор (часто обозначаемый как Dm) — это аккорд, вызывающий чувство меланхолии и размышления о негативной стороне ситуаций. Как и многие другие минорные аккорды, Dm может создать тяжелую, серьезную атмосферу, а иногда даже создает почти потустороннее ощущение драмы.

    Встроенное содержимое: https: // youtu.be / oZswGpF1H6A? rel = 0

    Пример игры минорного аккорда выше.

    Игра на аккорде DM

    Гитарный аккорд Dm является основным аккордом в каталоге нот, поэтому его изучение имеет решающее значение для исполнения более широкой песенной базы. К тому же это довольно простой аккорд, поэтому выучить его довольно просто.

    Стандартный способ играть аккорд Dm начинается на 1-м ладу:
    • — Поместите указательный (или 1-й палец) на 1-й лад первой струны (высокая ми).
    • — Затем поместите средний палец на 2-й лад третьей (G) струны.
    • — Наконец, поместите безымянный палец (3-й палец) на 3-й лад второй (B) струны.
    • — Когда ваши пальцы расположены правильно, играйте с четвертой (D) струны вниз. Не играйте на 5-й (A) и 6-й (нижняя ми) струнах.

    Аккорд ре минор — относительно легкий аккорд, но новичкам может потребоваться некоторое время, чтобы привыкнуть к нему, так как он включает в себя растягивание пальцев на трех ладах.Если вы только начинаете играть на гитаре, это ключевой аккорд, который нужно выучить, потому что он часто встречается в песнях всех жанров.

    Dm Хорда в открытом положении (v1)

    • — E (низкий) — не люфтить
    • — А — не играть
    • — Г — открытый
    • — G — средний палец на 2 ладу
    • — Б — безымянный палец на 3-м ладу
    • — E (высокий) — указательный палец на 1 ладу

    Чтобы сыграть эту версию аккорда ре минор с использованием числовой записи, вы должны использовать следующий паттерн: x, x, 0, 2, 3, 1

    Существует также более простой способ сыграть аккорд Dm двумя пальцами, однако он не будет звучать так же полно, как аккорд Dm в открытом положении.

    Для упрощенной версии аккорда Dm (также известного как приостановленный аккорд Dsus2 или D) поместите указательный (первый) палец на второй лад третьей (G) струны. Затем поместите безымянный палец на 3-й лад второй (си) струны. Оставляя открытыми первую и четвертую струны, сыграйте вниз. Не играйте на пятой (A) и шести (low E) струнах.

    Dsus2 (приостановлено) Хорда в открытом положении

    • — E (низкий) — не люфтить
    • — А — не играть
    • — D — открытая игра
    • — G — указательный палец на 2-м ладу
    • — Б — безымянный палец на 3-м ладу
    • — E (высокий) — открытая игра

    Для этого аккорда следует использовать следующие числовые обозначения: x, x, 0, 2, 3, 0

    Какие ноты составляют аккорд Dm?

    Аккорд Dm следует модели нот трезвучия других минорных аккордов.Он состоит из трех банкнот:

    D, F и A

    Его часто считают меланхолическим аккордом, но из-за его разнообразного использования аккорд Dm трудно привязать к одной конкретной эмоции.

    Песни, в которых используется аккорд Dm

    Поп-песни

    «In the Night» — хит

    The Weeknd — сочетает в себе мощную динамическую ударную секцию с более мягким и тревожным выбором аккордов, который демонстрирует сложность и универсальность аккорда Dm.

    Не все песни, в которых есть аккорд Dm и другие минорные ноты, должны быть меланхоличными и тревожными.«(Love Is Like a) Heat Wave» Марты Ривз и Ванделлас показывает, насколько запоминающимся может быть аккорд Dm в сочетании с запоминающейся мелодией и партией валторны.

    Фолк / блюз

    Kaleo плавно жонглирует между блюз-роком и эмбиент-акустическим фолком. Песня этой исландской группы «All the Pretty Girls» попадает в последнюю категорию, поскольку в ней используется аккорд Dm, чтобы придать этой акустической жемчужине атмосферу Bon Iver.

    Рок-песни

    Если есть что-то, о чем не стоит говорить, так это влияние Pink Floyd на рок-жанр. И с одной из их самых известных песен, включающей аккорд Dm в преследующий хоровой припев, «Another Brick in the Wall Pt. 2 »является ярким примером непреходящего наследия группы.

    The Beach Boys и минорные аккорды могут показаться противоположностями, привлекающими в музыкальном спектре, но то, как эта гармоничная серферская команда создала оптимистичную и запоминающуюся песню в «Help me, Rhonda» с более мрачными аккордами Dm и Am, является свидетельством этого. их музыкальное мастерство.

    Можно сказать, что аккорд Dm звучит серьезно, даже благочестиво по характеру и тону.Эта идея полностью и искренне доказана в исповедальном треке R.E.M. «Losing My Religion».

    Кто сказал, что добавление банджо автоматически делает исполнителя народным? «Take It All Back 2.0» Judah & The Lion — это современная фолк / рок-ода прошлым, настоящим и будущим аналогам любви, в которой аккорды Dm задают мучительное настроение тому, что могло быть и что будет.

    Кантри-песни

    Гимн кантри 90-х годов Триши Йервуд «She’s in Love with the Boy» сочетает в себе неотразимо запоминающийся припев с быстрым куплетом.В результате получилась классика кантри, в которой заметно выделяется аккорд Dm.

    Теперь, когда вы вооружены несколькими способами сыграть аккорд ре минор, начните играть его и разучивайте песни, в которых используется этот универсальный аккорд. Попрактиковавшись, вы сможете расширить свой словарный запас по аккордам и добавить новые песни в свой репертуар.

    Теперь, когда вы вооружены несколькими способами сыграть аккорд ре минор, начните играть его и разучивайте песни, в которых используется этот универсальный аккорд. Если вы хотите научиться играть еще больше аккордов, просмотрите библиотеку аккордов Fender Play, узнайте о типах аккордов и найдите советы по их освоению. .

    Если вы новичок в игре на гитаре, вы можете начать с бесплатной пробной версии Fender Play!

    Как читать схемы аккордов

    В этом уроке игры на гитаре мы научимся читать схемы аккордов. Диаграммы аккордов — это графики, которые говорят вам, где положить пальцы на гриф, чтобы взять определенный аккорд. Часто диаграммы аккордов можно увидеть в верхней части музыкальной таблицы или по всей таблице. Иногда они помещаются туда на случай, если вы не знаете аккорд, но иногда человек, который написал песню, хочет, чтобы эта конкретная форма была воспроизведена для этого аккорда.

    Аккордовая диаграмма состоит из шести вертикальных линий, обозначающих струны гитары, и нескольких горизонтальных линий, обозначающих лады. Крайняя левая строка представляет нижнюю E, а крайняя правая строка представляет высокую E. Иногда вы видите диаграммы с простыми черными точками, указывающими, куда вы должны положить пальцы, а иногда вы видите черные точки с числами в них. Эти числа представляют номер пальца, которым вы должны пользоваться, играя эти ноты.

    Узнайте, как считать пальцы для гитары здесь!

    Есть еще пара символов диаграммы аккордов, о которых вам следует знать.Если вы видите прямоугольный блок в верхней части диаграммы, это просто гайка гитары. Если вы не видите гайки, вы, вероятно, увидите число слева от диаграммы, которое указывает, на каком ладу вы должны быть. Знак X над одной из струн означает, что вы должны отключать звук или просто не играть на этой струне. Если вы видите черную точку или просто кружок над одной из струн, это означает, что вы должны играть на этой струне открытой. Толстые черные линии или дуги, проходящие над несколькими строками, представляют полосы.Если вы видите такую ​​толстую черную линию, вы, вероятно, играете тактовый аккорд.

    Узнайте, как пронумеровать гриф здесь!

    Теперь, когда вы знаете, что означают все символы на диаграмме аккордов, давайте попробуем несколько примеров. Начните с открытого аккорда соль мажор. Если вы посмотрите на схему этого аккорда, вы увидите точки на 3-м ладу 6-й струны, 2-м ладу 5-й струны и 3-м ладу 1-й струны. Все остальные струны будут иметь точки или кружки над ними, чтобы указать, что вы должны играть на них открытыми.

    Попробуйте такт соль мажор. В этом примере вы увидите толстую черную линию или дугу на всех шести струнах. Это полоска с вашим 1-м пальцем. Скорее всего, вы увидите цифру 3 слева от диаграммы, указывающую на то, что вам следует разместить такт на 3-м ладу. На этой диаграмме было бы еще три точки. Точки представляют ваш 3-й палец на 5-м ладу 5-й струны, 4-й палец на 5-м ладу 4-й струны и 2-й палец на 4-м ладу 3-й струны.Опять же, на некоторых диаграммах могут быть номера пальцев на точках, а на некоторых — нет.

    Поначалу чтение диаграмм аккордов может происходить медленно, но если вы будете придерживаться этого правила, вы сразу же начнете узнавать определенные диаграммы аккордов. Возьмите музыку, которая вам нравится, или найдите ее в Интернете. Посмотрите, сможете ли вы прочитать схемы аккордов и, возможно, даже выучить новые аккорды в процессе.

    После того, как вы закончите этот урок игры на гитаре, вы, возможно, захотите узнать больше о теории игры на гитаре и прочитать гитарные ноты!

    (PDF) Оценка гитарной струны, лада и положения защелкивания с использованием параметрической оценки высоты тона

    6.СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

    [1] М. Карьялайнен, В. V¨

    alim¨

    aki и Z. J´

    anosy, «На пути к высококачественному синтезу звука гитары и струнных инструментов

    »,

    in Computer Music Association, 1993, стр. 56–63.

    [2] M. Laurson, C. Erkut, V. V¨

    alim¨

    aki, и M. Kuuskankare,

    «Методы моделирования реалистичной игры в син-

    тезисе акустической гитары», Компьютерная музыка Журнал, т. 25, нет.3, стр. 38–49,

    2001.

    [3] К. Р. Салливан, «Расширение алгоритма karplus-strong для синхронизации тембров электрогитары размера

    с искажением и обратной связью»,

    Computer Music Journal, vol. 14, вып. 3, pp. 26–37, 1990.

    [4] Г. Дж. Абессер и Х. Лукашевич, «Основанное на признаках извлечение

    стилей ощипывания и экспрессии электрического баса», Proc.

    IEEE Int. Конф. Acoust., Speech, Signal Process., 2012.

    [5] А.Pat´

    e, J.-L. Ле Карру и Б. Фабр, «Прогнозирование времени затухания

    звуков твердотельной электрогитары», J. Acoust. Soc. Am.,

    т. 135, нет. 5, pp. 3045–3055, 2014.

    [6] C. Erkut, V. V¨

    alim¨

    aki, M. Karjalainen и M. Laurson, «Ex-

    тяга физического и выразительного параметры для синтезированного звука классической гитары на основе модели

    », в Audio Eng. Soc.,

    2000.

    [7] Дж. Абессер, «Автоматическое определение струн для бас-гитары и электрогитары

    », в От звуков к музыке и эмоциям.Springer

    Берлин Гейдельберг, 2013 г., стр. 333–352.

    [8] Ф. Жермен и Г. Евангелиста, «Синтез гитары с помощью цифровых волноводов

    : моделирование плектра при физическом взаимодействии

    игрока с инструментом», в Proc. IEEE Workshop on

    Appl. сигнального процесса. к Ауд. и акустика, 2009, стр. 25–28.

    [9] Г. Евангелиста и Ф. Экерхольм, «Модели взаимодействия проигрывателя и инструмента для цифрового волноводного синтеза гитары: прикосновение

    и столкновения», IEEE Trans.Audio, Speech, Language Pro-

    cess., Vol. 18, нет. 4, pp. 822–832, 2010.

    [10] С. Пуаро, С. Бильбао, М. Арамаки и Р. Кронланд Мартине,

    «Морфология звука, обусловленная нелинейными взаимодействиями: к

    контроль процессов синтеза звуков окружающей среды

    »в сб. Int. Конф. Digital Audio Effects, 2018.

    [11] С. Бильбао и А. Торин, «Цифровое моделирование и звуковой син-

    тезис для взаимодействия сочлененных струн и грифа», J.Аудио

    англ. Soc., Т. 63, нет. 5, pp. 336–347, 2015.

    [12] Н. Х. Флетчер и др. «Рваные струны — обзор», Catgut

    Acoust. Soc. Информационный бюллетень, т. 26, pp. 13–17, 1976.

    [13] Н. Х. Флетчер, Т. Д. Россинг, Принципы вибрации и

    звука, 2-е изд. Springer, 2004.

    [14] Донкин У. Ф. Акустика, 2-е изд. Oxford Clarendon Press,

    1884.

    [15] Л. Рэлей, Теория звука, 1-е изд. MacMillan и

    Co.Ltd., Лондон, 1894.

    [16] Р. С. Шенкленд и Дж. У. Колтман, «Отличие более

    тонов вибрирующей проволоки от истинного гармонического ряда», J. Audio

    Eng. Soc., Т. 10, вып. 3, pp. 161–166, 1939.

    [17] Т. Д. Россинг, Наука о струнных инструментах, 1-е изд.

    Springer, 2010.

    [18] Х. Флетчер, «Нормальные частоты колебаний жесткой струны фортепиано

    », J. Audio Eng. Soc., Т. 36, pp. 203–209, 1964.

    [19] C.Диттмар, А. Маннхен и Дж. Абессер, «Гитара

    в реальном времени, обнаружение струн для программного обеспечения для музыкального образования», в Proc. Int.

    Семинар по анализу изображений для мультимедийных интерактивных сервисов

    vices, 2013, стр. 1–4.

    [20] И. Барбанчо, Л. Тардон, С. Саммартино и А. Барбанчо,

    «Метод на основе негармоничности для автоматического создания гитарной табулатуры

    », IEEE Trans. Audio, Speech, Language Pro-

    cess., Vol. 20, нет. 6. С. 1857–1868, 2012.

    [21] Дж. Дж. Михельсон, Р. М. Стерн и Т. М. Салливан, «Автоматическая транскрипция гитарных табулатур

    из аудио с использованием негармоничности

    регрессии и байесовской классификации», в Audio Eng. Soc.,

    2018.

    [22] З. Мохамад, С. Диксон и К. Харт, «Положение звукоснимателя и оценка точки захвата

    на электрогитаре», в Proc. IEEE

    Int. Конф. Acoust., Speech, Signal Process., 2017.

    [23] К. Траубе и Дж. О. Смит, «Оценка точки защипа на гитарной струне

    », Proc.Int. Конф. Digital Audio Effects, 2000.

    [24] К. Траубе и П. Депаль, «Извлечение точки возбуждения

    положения на струне с использованием взвешенной оценки методом наименьших квадратов

    задержки гребенчатого фильтра», в Proc. Int. Конф. Digital Audio Effects,

    2003.

    [25] Х. Пенттинен и В. V

    alim¨

    aki, «Подход во временной области к оценке

    времени точки перехвата гитарных тонов, полученных с помощью

    звукосниматель под седлом, Прикладная акустика, т.65, нет. 12, pp.

    1207–1220, 2004.

    [26] JK Nielsen, TL Jensen, JR Jensen, MG Christensen и

    SH Jensen, «Быстрая оценка основной частоты: создание статистически эффективной оценки. вычислительно эффективный »,

    Обработка сигналов, т. 135, стр. 188–197, 2017.

    [27] М. Г. Кристенсен и А. Якобсен, Оценка нескольких шагов,

    , 1-е изд. Morgan and Claypool, 2009.

    [28] M. W. Hansen, J.M. Hjerrild, M. G. Christensen, J. Kjeld-

    skov, «Параметрическое многоканальное разделение и перепанмирование источников гармоник

    », Proc. Int. Конф. Digital Audio Effects,

    2018.

    [29] М. Г. Кристенсен, П. Стойка, А. Якобссон и С. Х. Йенсен,

    «Оценка нескольких звуков», Обработка сигналов, т. 88, нет. 4, pp.

    972–983, 2008.

    [30] Дж. М. Филлипс, «Дизайн Джеффри Филлипса», http: //www.imjeffp.

    ком /, 2018.

    [31] С. Лоуренс Марпл, «Вычисление дискретного времени аналитического сигнала

    через fft», IEEE Trans. Сигнальный процесс., Т. 47, pp. 2600–

    2603, 1999.

    [32] О. Лартилло и П. Тойвиайнен, «Набор инструментов Matlab для извлечения музыкальных функций

    », Proc. Int. Конф. Digital Audio Effects,

    2000.

    [33] JK Nielsen, TL Jensen, JR Jensen, MG Christensen и

    SH Jensen, «Выбор размера сетки для нелинейного метода наименьших квадратов

    , оптимизация в спектральной оценке и обработке массивов. ”В

    Proc.Европейская конференция по обработке сигналов, август 2016 г., стр. 1653–

    1657.

    [34] Д. Р. Ф. ван дер Хейден, Р. П. У. Дуин и Д. Налог, Классификация

    , Оценка параметров и оценка состояния, 1-е изд. Джон

    Wiley and Sons, Ltd. , 2004.

    [35] Н. Х. Флетчер, Т. Д. Россинг, Физика музыкальных инструментов

    , 2-е изд. Springer, 1998.

    Одномолекулярный FRET высокого разрешения посредством обмена ДНК (FRET X)

    РЕФЕРАТ

    Одномолекулярный FRET — универсальный инструмент для изучения нуклеиновых кислот и белков в нанометровом масштабе.Однако в настоящее время только пара пар FRET может быть надежно измерена на одном объекте. Ограниченное количество доступных парных флуорофоров FRET и сложный анализ данных затрудняют применение одномолекулярного FRET для структурного анализа биомолекул. В настоящее время только пара пар FRET может быть надежно измерена на одном объекте. Здесь мы представляем подход, который позволяет определять несколько расстояний между парами FRET в одном объекте. Мы используем программируемое временное связывание между короткими цепями ДНК для определения эффективности FRET нескольких пар флуорофоров.Допуская единовременное формирование только одной пары FRET, мы можем определить эффективность FRET и расстояние между парами с субнанометровым разрешением. Мы определяем расстояние между другими парами, последовательно меняя нити ДНК. Мы называем этот подход мультиплексирования FRET X вместо FRET посредством обмена ДНК. Мы предполагаем, что наша технология FRET X станет инструментом для структурного анализа биомолекул и других наноструктур с высоким разрешением.

    ВВЕДЕНИЕ

    Рентгеновская кристаллография, ядерный магнитный резонанс (ЯМР) и криоэлектронная микроскопия являются золотым стандартом для определения структуры биомолекул. 1,2 Однако мельчайшие и быстрые конформационные изменения часто невозможно наблюдать с помощью этих методов, поскольку необходимая подготовка образца может стабилизировать определенную конформацию молекулы. 3 Кроме того, ни один из этих методов не способен обнаруживать в клетке редкие виды, для которых требуется чувствительность к одной молекуле. Одномолекулярный FRET можно использовать для определения структуры молекул с субнанометровым разрешением. Однако использование одномолекулярного FRET для анализа сложных молекулярных структур (например,грамм. белковые третичные структуры) был ограничен, поскольку он требует определения эффективности FRET для нескольких пар красителей. 4,5 В настоящее время анализ FRET одной молекулы позволяет нам иметь дело только с одной или двумя парами FRET за одно измерение. 6,7 Следовательно, структурный анализ с использованием одномолекулярного FRET требует подготовки библиотеки белков, состоящей из множества различных комбинаций местоположений красителя, тщательного моделирования и моделирования после сбора данных. 8–11

    Одномолекулярное мультиплексирование было продемонстрировано с фотопереключаемыми флуорофорами.В этом подходе интересующая молекула помечается одним донором и двумя или более идентичными акцепторными флуорофорами. При использовании фотопереключаемых акцепторных флуорофоров только один из акцепторов активен в данный момент времени. 12 Этот метод, называемый FRET с фотопереключением, позволяет обнаруживать несколько пар FRET в одном наноразмерном объекте и определять структуры и взаимодействия между биомолекулами, от белков до ДНК. Однако стохастический характер фотопереключения и ограниченное количество стратегий химии ортогонального прикрепления для мечения красителя являются основными препятствиями для широкой адаптации метода.Альтернативный способ переключения между включенным и выключенным состояниями флуоресцентных зондов заключается в использовании флуорофоров, которые связывают цель только в течение короткого периода времени, как при накоплении точек в наноразмерной топографии (PAINT). 13–15 Например, флуорофоры прикреплены к коротким олигонуклеотидам ДНК, которые связывают комплементарные цепи-мишени в течение нескольких сотен миллисекунд. Это временное связывание является центральным для метода сверхвысокого разрешения, основанного на ДНК накопления точек для визуализации в наноразмерной топографии (DNA-PAINT). 16–19

    Здесь мы предлагаем новый инструмент структурного анализа одной молекулы, который может определить эффективность FRET нескольких пар в одной молекуле-мишени. Используя программируемое временное связывание между короткими цепями ДНК, в любой момент времени формируется одна пара FRET, что позволяет определять расстояние между мгновенно активированной парой флуорофоров. Повторяя цикл визуализации, мы можем определить несколько точек интереса (POI) в одном наноразмерном объекте. Мы демонстрируем доказательство концепции структурного анализа одиночных молекул с субнанометровым разрешением на структурах ДНК.

    РЕЗУЛЬТАТЫ

    Чтобы продемонстрировать концепцию FRET с помощью цепей визуализатора ДНК, мы сначала протестировали измерения FRET одной молекулы с временно связывающейся меченной красителем цепью визуализатора ДНК. Мы разработали анализ, в котором одноцепочечная (ss) цепь ДНК, меченная акцептором (Cy5), иммобилизована на кварцевом предметном стекле посредством конъюгации биотин-стрептавидин (, рис. 1A, ). Измерения дали отчетливый сигнал FRET при связывании между меченной донором цепью имидж-сканера и иммобилизованной цепью-мишенью (, рисунок 1B, ).Сигналы FRET регистрировались с помощью микроскопии полного внутреннего отражения. Последовательность цепи формирователя изображения была выбрана таким образом, чтобы события связывания между двумя цепями ДНК имели короткое время пребывания, чтобы обеспечить частое пополнение цепи формирователя изображения ( Рисунок 1C, ). Это позволяет исследовать один и тот же POI несколько раз. В то же время время задержки событий связывания между имидж-сканером и иммобилизованными нитями было выбрано несколько сотен миллисекунд или больше для точного определения эффективности FRET.

    Рис. 1: Повторяющееся связывание короткой цепи сканера ДНК обеспечивает высокую точность обнаружения FRET одиночной молекулы.

    A) Схематическое изображение анализа FRET одной молекулы. Меченная акцептором (Cy5, красная звездочка) конструкция одноцепочечной целевой ДНК иммобилизуется на ПЭГилированной поверхности посредством конъюгации биотин-стрептавидин. Связывание меченой цепи донора (Cy3, зеленая звезда) приводит к коротким событиям FRET и наблюдается с помощью микроскопии полного внутреннего отражения.

    B) Серия снимков CCD, полученных из фильма с одной молекулой с выдержкой 100 мс.Верхний ряд представляет донорный канал, а нижний ряд представляет акцепторный канал. Каждая точка представляет собой одну молекулу. Динамическое связывание цепей имидж-сканера можно наблюдать с течением времени (выделенная молекула).

    C) Схематическое изображение конструкций оцДНК. После связывания цепи формирователя изображения донорный флуорофор отделяется от акцептора 25-нуклеотидным тиминовым линкером.

    D) Одномолекулярный кимограф FRET по временной шкале одной отдельной молекулы (выделенная молекула на рис.1Б). Кимограф показывает эффективность FRET для каждой точки данных в событии привязки (строки) и среднюю эффективность FRET для всех точек данных на событие привязки (точки) как функцию времени. Все средние значения эффективности FRET нанесены на гистограмму и снабжены функцией Гаусса (нижняя панель).

    Для визуализации эффективности FRET каждой пары красителей, появляющейся в поле зрения, мы построили кимограф FRET (рисунок 1D и дополнительный рисунок 1A ). Кимограмма показывает эффективность FRET для каждой точки данных ( Рисунок 1D, линии ) и среднюю эффективность FRET для всех точек данных на событие связывания ( Рисунок 1D, точки ).Гистограмма FRET, построенная на основе средних значений, соответствует единственному распределению Гаусса (, рис. 1D, внизу ) ( E = 0,72 со стандартным отклонением 0,01). Кимограф ансамбля, построенный из всех 363 молекул для этой конструкции, показывает аналогичное среднее значение FRET 0,71 ± 0,02 ( Дополнительный рисунок 1B ).

    Структурный анализ сложных биомолекул с использованием FRET одной молекулы требует обнаружения нескольких пар FRET в одном объекте. Чтобы избежать перекрестных помех между разными парами FRET, каждый POI должен быть измерен в течение короткого промежутка времени с использованием коротких цепей формирователя изображения ДНК, тем самым разделяя события связывания FRET каждой пары во времени.Поэтому мы разработали меченые донором нити имидж-сканера, которые могут взаимодействовать с одним POI только в течение 2-3 секунд (, дополнительные рисунки 2A и B, ), что достаточно долго, чтобы определить эффективность FRET. Мы разработали конструкцию оцДНК с двумя целевыми последовательностями. Связывание меченой донором цепи имидж-сканера с конструкцией оцДНК давало либо высокий, либо средний сигнал FRET (, рис. 2А, ). Для целевой конструкции, которая состояла из двух POI, которые были разделены 5-нуклеотидным линкером (, фиг. 2B, ), наблюдались два пика FRET (, фиг. 2D, ), сообщающие о местоположении каждого POI.Однако, когда два POI были размещены без какой-либо линкерной последовательности между ними (, фиг. 2C, ), гистограмма FRET стала неразрешимой (, фиг. 2E, ). Мы пришли к выводу, что невозможно определить парные расстояния нескольких точек интереса с высоким пространственным разрешением с помощью одной цепи формирователя изображения.

    Рис. 2: FRET за счет обмена уникальными нитями формирователя изображения обеспечивает высокое пространственное разрешение нескольких точек интереса в одном наноразмерном объекте.

    A) Схематическое изображение экспериментов с одной молекулой с двумя целевыми последовательностями.Используется одна цепь имидж-сканера, которая может связываться с обоими POI в молекуле-мишени. Меченная акцептором (Cy5, красный кружок) конструкция оцДНК содержит два POI. Связывание меченой цепи донора (Cy3, зеленый кружок) имидж-сканера приводит либо к высокому FRET (при связывании с POI A), либо к среднему FRET (при связывании с POI B).

    B и C) Схематическое изображение целевых конструкций, в которых два POI разделены линкером 5 Thymine (рис. 2B) или в которых два POI напрямую связаны друг с другом (рис.2С).

    Одномолекулярный кимограф целевой конструкции оцДНК из фиг. 2В. На верхней панели показаны события связывания, полученные для всех молекул в одном поле зрения. Нижняя панель показывает гистограмму FRET, состоящую из пика только для донора и двух дополнительных пиков FRET, сообщающих о расположении каждого POI относительно акцепторного флуорофора.

    Одномолекулярный кимограф целевой конструкции оцДНК из фиг. 2С. Использование одной и той же цепи имидж-сканера для обоих точек интереса не позволяет определять положение обеих точек интереса, когда они находятся в непосредственной близости.Гистограмма FRET показывает широкий пик на 0,81.

    Схема рабочего процесса FRET при замене цепи тепловизора (или FRET X). Конструкции-мишени оцДНК состоят из двух точек POI с уникальными последовательностями связывания ДНК, что позволяет нам измерять точки POI по одной за раз. В первом раунде обнаружения добавляется жгут тепловизора для POI B (синие кружки) и снимается в течение 5 минут. Затем микрофлюидная камера промывается и добавляется жгут тепловизора для точки POI A (оранжевые кружки).

    G и H) Схематическое изображение целевых конструкций FRET X, в котором две уникальные последовательности POI — синие кружки (POI B) или оранжевые кружки (POI A) разделены тиминовым линкером из 5 нуклеотидов (рис.2G) или в котором две точки интереса находятся непосредственно рядом (рис. 2H).

    I и J) Кимографы одиночных молекул для FRET X для конструкций на фиг. 2G и 2H. Визуализация FRET X позволяет определять каждую точку интереса в отдельном раунде. Для конструкции, в которой POI были разделены 5-нуклеотидным линкером тимина, мы наблюдали отчетливый пик FRET при 0,73 (фиг. 2I, верхняя панель) и 0,88 (фиг. 2I, нижняя панель) для POI A и B, соответственно. FRET X позволяет точно обнаруживать POI, даже когда они находятся в непосредственной близости. Мы наблюдали отчетливые пики FRET 0,73 (рис. 2J, верхняя панель) и 0,81 (рис. 2J, нижняя панель) для точек интереса A и B, соответственно.

    K) Подгонка по Гауссу индивидуальных гистограмм для каждого POI, полученного с использованием подхода FRET X, позволяет определить центр пика с точностью 1% p (или ΔE ~ 0,01). Центры пиков нанесены на отдельную панель, которую мы называем отпечатком FRET наноразмерного объекта.

    Для достижения более высокого пространственного разрешения мы стремились независимо обнаруживать различные точки интереса, чтобы перекрывающиеся пики FRET могли быть получены отдельно и более точно подогнаны.Как проиллюстрировано в , рис. 2F, , каждый POI был измерен с использованием уникальной короткой цепи ДНК-сканера. После того, как события связывания для первого POI были записаны в течение нескольких минут, цепь формирователя изображения была заменена путем промывки микрофлюидной камеры и инъекции уникальной цепи устройства формирования изображения ДНК для второй POI (, рис. 2F, ). Этот процесс можно повторить для любого количества точек интереса. Мы называем это «FRET X» для FRET посредством обмена ДНК.

    Чтобы продемонстрировать концепцию FRET X, мы разработали конструкции оцДНК с двумя точками интереса, каждая из которых содержит уникальную целевую последовательность.POI были разделены 5-нуклеотидным линкером тимина (, фиг. 2G, ) или находились ближе друг к другу, без линкера между ними (, фиг. 2H, ). В первом раунде обнаружения FRET X мы определили, что пик FRET составляет 0,74 для POI B, расположенного на расстоянии 35 нуклеотидов от акцептора (, рис. 2I, верхняя панель, ). Затем микрофлюидная камера была промыта, и была введена нить формирователя изображения, комплементарная точке POI A. Во втором раунде визуализации FRET X мы наблюдали единственный пик FRET при 0.88, сообщая о втором POI, который был отделен от POI B 5-нуклеотидным тиминовым линкером ( Рисунок 2I, нижняя панель ). Как показано на рис. 2H , FRET X позволяет точно определять эффективность FRET обоих точек интереса, даже если они не разделены линкером и находятся в непосредственной близости. Эти пики FRET нельзя было различить с помощью обычного FRET, как показано на рис. 2E . В первом раунде FRET X мы наблюдали пик FRET при 0,73 для POI B ( Рисунок 2J, верхняя панель ), а во втором раунде мы наблюдали пик FRET при 0.81 для POI A ( Рисунок 2J, нижняя панель ). Каждая гистограмма показывала широкое распределение пика ~ 10% p (стандартное отклонение). Однако гауссовское приближение можно использовать для определения центра пика с высокой точностью ~ 1% p (стандартная ошибка среднего) и зависит от количества событий связывания ( Дополнительный рисунок 3 ). Разрешенные значения FRET для каждого POI могут быть нанесены на график как отпечаток FRET измеряемого объекта (, рис. 2K, ).

    Для дальнейшего исследования достижимого разрешения FRET X, мы разработали серию нитей имидж-сканера, в которых положение донорского флуорофора изменено только одним основанием среди разных нитей имидж-сканера (, рис. 3A, ).Затем цикл FRET X был повторен для всех девяти ветвей тепловизора. Центр пика каждой гистограммы был определен путем аппроксимации одной функцией Гаусса, и полученный отпечаток показал девять отдельных пиков, по одному для каждого меченного донором нуклеотида (, фиг. 3 B-J ).

    Рисунок 3: Разрешение одного нуклеотида может быть достигнуто с помощью FRET X.

    A) Схематическое изображение одномолекулярных конструкций, используемых для определения различных POI, разделенных одной парой оснований.Акцептор (Су5, красный кружок) меченой целевой конструкцией оцДНК, состоящей из 9 нуклеотидной последовательности-мишени (оранжевые кружки), с которой может связываться каждая цепь формирователя изображения. Серия доноров (Cy3, зеленые кружки) помечена нитями имидж-сканера FRET X. Положение каждого POI (или нуклеотида) в целевой последовательности будет определяться один за другим с использованием нашего подхода FRET X.

    B-J) Кимографы для каждого из POI, определенных с помощью FRET X. Верхний кимограф получают с помощью цепи формирователя изображения, где донорный флуорофор связывается ближе всего к акцептору (разделенному 25-тиминовым линкером).Каждый следующий кимограф выполняется с последующей цепью формирователя изображения, где расстояние до акцептора увеличивается на одну пару оснований. Мы получили девять отдельных гистограмм FRET, по одной для каждой из меченных донорами пар оснований с использованием FRET X. На нижней панели показаны девять четко разделенных пиков в отпечатке пальца FRET. Отпечаток пальца показывает центр каждой гауссовой аппроксимации, полученной с использованием нашего подхода FRET X.

    K) Стандартная ошибка эффективности FRET X для цепи 5 имидж-сканера (рис. 3F) в зависимости от количества событий связывания.Мы наблюдаем, что мы можем определить центр гауссовой аппроксимации с точностью FRET X ΔE ~ 0,01 после> 10 событий привязки.

    L) Средняя эффективность FRET X для каждой точки POI, определенной в разные дни. Мы обнаружили хорошую воспроизводимость FRET X. Средняя эффективность FRET и стандартное отклонение рассчитаны на основе 3 независимых экспериментов.

    Чтобы определить точность, которую можно получить с помощью нашего подхода FRET X, стандартная ошибка эффективности FRET была построена как функция событий привязки числа.Выбранные события были из цепи формирователя изображения, помеченной в позиции 5 (, рис. 3F, ), что дало значение эффективности FRET 0,65. Мы обнаружили, что центр гауссовой аппроксимации может быть определен с точностью до 1% p (или Δ E ~ 0,01) после получения> 10 событий связывания ( Рисунок 3K ). Воспроизводимость FRET X была продемонстрирована путем измерения всех девяти маркированных цепей имидж-сканера в разные дни. Как показано на рис. 3L , стандартное отклонение между измерениями, сделанными в разные дни, составляет около 2% p для каждой конструкции.

    Наконец, чтобы продемонстрировать возможность использования FRET X для анализа структуры на уровне отдельной молекулы, мы разработали две конструкции оцДНК со структурными различиями и проверили, можно ли различить отдельные молекулы, когда они смешиваются случайным образом. Конструкции оцДНК состоят из двух точек доступа, одна из которых расположена в идентичном положении на двух конструкциях ДНК. Второй POI соединен со стороной одного из нуклеотидов в основной последовательности и имеет другое расположение на двух конструкциях (фиг. 4A и дополнительные фигуры 4 и 5, ).Чтобы избежать фотообесцвечивания акцепторного красителя, мы разработали уникальную последовательность около 3’-конца конструкции, где может временно связываться маркированная комплементарным акцептором цепь визуализатора. Мы иммобилизовали смесь двух конструкций в соотношении 1: 1.

    Рисунок 4: Структурный анализ отдельных молекул с использованием FRET X.

    Схематическое изображение конструкций ДНК, используемых для структурного анализа. Конструкция оцДНК содержит две точки POI, одна из которых является фиксированной и имеет то же положение относительно акцептора на обеих конструкциях.Второй POI соединен с боковой цепью одного из нуклеотидов в основной последовательности и имеет другое расположение в обеих конструкциях.

    B-D) Кимографы, полученные для равной смеси конструкций оцДНК, иммобилизованных на поверхности предметного стекла. Цикл FRET X состоял из 3 раундов.

    B) В первом раунде цикла FRET X мы наблюдали два пика FRET, сообщающих о расстоянии POI A от акцептора для обеих конструкций.

    C) Второй раунд цикла FRET X привел к единственному пику, полученному из FRET между POI B и акцептором, который идентичен в обеих конструкциях.

    D) В последнем раунде цикла FRET X мы подтвердили местоположение POI A и наблюдали те же пики FRET, что и в раунде 1.

    E и F) Гистограммы, показывающие доли совпадений и несовпадений отпечатков пальцев для отдельных молекул, которые были идентифицированы как конструкция со средним (фиг. 4E) или высоким FRET (фиг. 4F). Мы определили среднюю эффективность FRET отпечатка пальца со средним или высоким FRET в первом раунде и сравнили его с погрешностью обнаружения Δ E ~ 0,07 с раундом 3, чтобы найти положительные совпадения.Большинство молекул было идентично идентифицировано между раундами 1 и 3, для конструкций FRET оцДНК со средним (рис. 4E) и высоким (рис. 4F) FRET.

    В первом раунде FRET X, мы определили эффективность FRET для POI A и наблюдали два различных популяций FRET отчетности по отчетливому расстоянию между POI A и опорным акцептором точкой, в зависимости от конструкций ( Фиг. ). Затем мы промыли микрофлюидную камеру и вводили нить формирователя изображения для POI B. Как и ожидалось, мы наблюдали один пик для POI B, сообщая о схожем положении POI B для обеих конструкций ( Рисунок 4C, ).В последнем раунде FRET X мы подтвердили местоположение POI A путем повторной инъекции цепи формирователя изображения для POI A назад и наблюдали те же пики FRET, что и в раундах FRET X визуализации 1 (, рис. 4 B и D ).

    Для каждой отдельной молекулы мы определили среднюю эффективность FRET для POI A в раунде 1 и сравнили это с эффективностью FRET, полученной для POI A в раунде 3 ( Дополнительный рисунок 6, ). Большинство (> 80%) отдельных молекул в смеси имели аналогичную разрешенную эффективность FRET для POI A между раундами 1 и 3 для средних (, рис. 4E, ) или высоких (, рис. 4F, ) конструкций FRET. .Лишь небольшая часть молекул не показала совпадение между раундами FRET X из-за разной разрешенной эффективности FRET для POI A или отсутствия событий связывания цепей устройства отображения (, рис. 4E и F ). В целом эти результаты показывают, что метод FRET X способен обнаруживать структуру отдельных конструкций ДНК на уровне одной молекулы.

    ОБСУЖДЕНИЕ

    Здесь мы представляем доказательство концепции FRET X, нового инструмента для обнаружения нескольких пар FRET в одном объекте, который может использоваться для структурного анализа биомолекул.Наша методика FRET X основана на динамическом связывании коротких флуоресцентно меченых олигонуклеотидов с комплементарными стыковочными последовательностями на целевом объекте. Обычные методы FRET для одной молекулы сообщают об изменениях расстояния между одной парой красителей на одной молекуле. Были разработаны многоцветные подходы FRET, но их часто трудно реализовать из-за сложной подготовки образцов и сложного анализа сигналов мультиспектральной флуоресценции. Напротив, FRET X использует ортогональные нити формирователя изображения для разных точек интереса, что позволяет обнаруживать большое количество точек интереса на одном объекте.

    Стандартный одномолекулярный FRET-анализ белковых структур трудоемок, так как белковые молекулы необходимо модифицировать для сайт-селективного мечения. Мы продемонстрировали, что FRET X может быть инструментом для структурного анализа сложных биомолекул, поскольку он может сообщать о расстояниях нескольких точек интереса на одной биомолекуле. Путем ковалентного присоединения коротких цепей оцДНК, которые действуют как стыковочные цепи FRET X, к различным интересующим областям белка, можно будет обнаружить большое количество остатков или доменов в одном эксперименте.Например, для анализа структуры белка присоединение стыковочных цепей FRET X может быть выполнено с использованием ортогональной химии для открытых остатков цистеина или лизина в белках. Этот метод устраняет необходимость в сложной препаративной инженерии биомолекул для сайт-селективного мечения.

    МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

    Одномолекулярная установка

    Все эксперименты проводились на специально созданной установке микроскопа. Использовался инвертированный микроскоп (IX73, Olympus) с полным внутренним отражением на основе призмы. В сочетании с твердотельным лазером с диодной накачкой 532 нм (Compass 215M / 50 мВт, Coherent). Водный иммерсионный объектив 60x (UPLSAPO60XW, Olympus) использовался для сбора фотонов от красителей Cy3 и Cy5 на поверхности, после чего длиннопроходный фильтр 532 нм (LDP01-532RU-25, Semrock) блокировал возбуждающий свет. Дихроичное зеркало (635 dcxr, Chroma) отделяет сигнал флуоресценции, который затем проецируется на камеру EM-CCD (iXon Ultra, DU-897U-CS0- # BV, Andor Technology). Серию изображений EM-CDD записывали с помощью специальной программы на Visual C ++ (Microsoft).

    Сбор данных по одной молекуле

    Проточные кюветы с одной молекулой получали, как описано ранее. 20,21 Вкратце, чтобы избежать неспецифического связывания, кварцевые слайды (G. Finkerbeiner Inc) подвергали кислотному травлению пираньи и дважды пассивировали полиэтиленгликолем (PEG). Первый цикл ПЭГилирования выполняли с mPEG-SVA (Laysan Bio) и ПЭГ-биотином (Laysan Bio), после чего следовали второй цикл ПЭГилирования с помощью MS (PEG) 4 (ThermoFisher). После сборки микрофлюидной камеры слайды инкубировали с 20 мкл 0.1 мг / мл стрептавидина (Thermofisher) в течение 2 минут. Избыток стрептавидина удаляли с помощью 100 мкл Т50 (50 мМ Трис-HCl, pH 8,0, 50 мМ NaCl). Затем в микрофлюидную камеру добавляли 50 мкл оцДНК, меченной 75 пМ Cy5. После 2 минут инкубации несвязавшуюся оцДНК смывали 100 мкл Т50. Для экспериментов на Рисунке 1 50 мкл 10 нМ меченных донорами цепей имидж-сканера в буфере для визуализации (50 мМ Трис-HCl, pH 8,0, 500 мМ NaCl, 100 мМ MgCl 2 , 0,8% глюкозы, 0,5 мг / мл глюкозооксидазы ( Sigma), 85 мкг / мл каталазы (Merck) и 1 мМ Trolox (Sigma)).Все эксперименты с одномолекулярным FRET проводились при комнатной температуре (23 ± 2 ° C).

    Визуализация FRET X (рисунки 2 и 3)

    Для визуализации FRET X на рисунках 2 и 3 иммобилизовали 50 мкл 75 пМ целевых цепей ДНК, а несвязавшуюся ДНК смыли 100 мкл Т50 после 2 минут инкубации. Затем вводили буфер для визуализации, содержащий нить формирователя изображения для POI A (, рис. 2, ), или цепь визуализатора с внутренними нуклеотидами, помеченными в положении 1 (, рис. 3, ).После получения 2000 кадров при времени экспозиции 100 мс, микрофлюидная камера была промыта с помощью 1000 мкл T50 и была введена нить формирователя изображения для POI B (, рисунок 2, ) или внутренне маркированного нуклеотидного положения 2 (, рисунок 3, ). Этот цикл повторяли до тех пор, пока все внутренне меченые нуклеотиды не были измерены для рисунка 3.

    FRET X эксперименты для структурного анализа одиночных молекул (рисунок 4)

    Для замены буфера и визуализации одних и тех же молекул в одном поле зрения для разных раундов При визуализации FRET X трубки были подключены к входу и выходу микрофлюидной камеры.Одна из трубок была подключена к резервуару с буфером, а другая — к шприцу. Осторожно потянув за шприц, промывные буферы и растворы для визуализации были заменены без нарушения предметного столика.

    Для экспериментов с конструкциями разветвленной ДНК 50 мкл 75 пМ цепи-мишени разветвленной ДНК иммобилизовали в течение 2 минут, а несвязавшуюся ДНК удалили с помощью 100 мкл Т50. Чтобы увеличить вероятность передачи энергии между донорными и акцепторными флуорофорами, цепь формирователя изображения акцептора была разработана так, чтобы иметь скорость диссоциации ~ 0.1 с -1 . 22 Для долгосрочного сбора изображений был введен 50 мкл раствора для визуализации, состоящего из 100 нМ акцепторной цепи формирователя изображения и 10 нМ меченой донором цепи визуализатора для POI A, и камера визуализировалась в течение 15 минут при времени экспозиции 100 мс. Затем раствор для визуализации для POI A удаляли промыванием 1000 мкл T50 и добавляли раствор для визуализации POI B (50 мкл 100 нМ акцепторной цепи формирователя изображения и 10 нМ цепи визуализатора для POI B в буфере для визуализации). После этого второго раунда визуализации микрофлюидная камера была промыта 1000 мкл Т50, и точка интереса А была визуализирована снова путем инъекции свежего раствора для визуализации точки А.

    Анализ данных

    ПЗС-изображений были проанализированы с использованием специального кода, написанного на IDL (ITT Visual Information Solution), чтобы найти положение отдельных пар FRET и извлечь временные следы флуоресценции. Когда одно и то же поле зрения измеряется несколько раз (, рис. 4, ), коррекция дрейфа между измерениями и извлечение трассы выполнялись специально созданным кодом, написанным на Python (Python 3.7). Для визуализации флуоресценции одиночных молекул и временных кривых FRET мы использовали специальный код, написанный на Matlab (Mathworks).Для автоматического обнаружения отдельных событий связывания флуоресцентного штрих-кода мы использовали специальный код Python (Python 3.7), использующий алгоритм кластеризации двух состояний K-средних по сумме интенсивностей флуоресценции донора и акцептора отдельных молекул для идентификации кадров с высокой интенсивностью. . [Ким и др., В стадии подготовки] Чтобы избежать ложноположительных детекций, для дальнейшего анализа были выбраны только события связывания, которые длились более трех последовательных кадров. Эффективность FRET для каждого события связывания штрих-кода рассчитывалась и использовалась для построения кимографа FRET и гистограммы.Популяции на гистограмме FRET автоматически классифицируются с помощью моделирования смеси Гаусса и используются для определения наличия конкретных интересующих штрих-кодов. Код автоматического анализа на Python находится в свободном доступе по адресу (https://github.com/kahutia/transient_FRET_analyzer2).

    ВКЛАД АВТОРА

    М.Ф. и C.J. инициировали и разработали проект. М.Ф. и S.H.K. проводил эксперименты. S.H.K и I.S. написал программное обеспечение для анализа. M.F., S.H.K., C.J. проанализировали и обсудили данные.М.Ф. и СиДжей написал рукопись. Все авторы прочитали и улучшили рукопись.

    БЛАГОДАРНОСТИ

    Мы благодарим Викторию Глобайт за критическое чтение и отзывы. C.J. был поддержан программой Vrije Programma (SMPS) Фонда фундаментальных исследований материи и науки о человеческих границах (RGP0026 / 2019).

    ССЫЛКИ

    1. 1.↵
    2. 2.↵
    3. 3.↵
    4. 4.↵
    5. 5.↵
    6. 6.↵
    7. 7.↵
    8. 8.↵
    9. 9.

      Hellenkamp, ​​B., Wortmann, P., Kandzia, F., Zacharias, M. & Hugel, T. Многодоменная структура и коррелированная динамика, определяемые самосогласованными сетями FRET. 14, (2017).

    10. 10.
    11. 11.↵
    12. 12.↵
    13. 13.↵
    14. 14.
    15. 15.↵
    16. 16.↵

      Jungmann, R. et al. Микроскопия сверхвысокого разрешения с помощью флуоресцентной визуализации временного связывания на ДНК оригами. 4756–4761 (2010). DOI: 10.1021 / NL103427W

    17. 17.
    18. 18.
    19. 19.↵
    20. 20.↵
    21. 21.↵
    22. 22.↵

    ChordDiagrams: Создание сетки грифа для грифовых инструментов

    Создание ChordDiagrams для Fretted инструментов.
    Схемы аккордов вставляются как сгруппированные элементы рисования и, таким образом, впоследствии могут быть отредактированы.
    Поддерживает любое количество струн и ладов.

    Обратите внимание: что-то не работает во всех версиях LibreOffice до 5.4.3 и во всех версиях OpenOffice, которые я тестировал на Linux Mint и Ubuntu, что также нарушает некоторые интересные функции (импорт и применение стилей, редактирование существующих аккордов с помощью кнопки редактирования, экспорт изображений).
    LO-Bug-Report:
    https://bugs.documentfoundation.org/show_bug.cgi?id=113615
    Ошибка исправлена ​​в LO5.4.4! (Но SVG-экспорт не работает в упомянутых системах Linux)
    OO-Bug-Report:
    https://bz.apache.org/ooo/show_bug.cgi?id=127604

    Панель инструментов имеет 4 кнопки:
    1. Chordinput
    Эта кнопка позволяет вставлять новые или заменять выбранные аккорды путем ввода.
    Введите название аккорда, например c или cm
    Типы по умолчанию, помимо основных: 5,7, m, m7, m7b5, maj7, sus4,7sus4, dim7
    Эти типы по умолчанию могут быть транспонированы с помощью расширений «ChordTransposer» https: //. openoffice.org/de/node/18502

    Другие типы: -scale и -scalefull.
    Для создания горизонтальных диаграмм введите «-«, например,
    -c-scalefull создаст горизонтальную диаграмму, показанную на скриншоте

    В качестве альтернативы вы также можете ввести код аккорда, например C: x / 3/2/0/1/0
    Будет создан обычный аккорд C: C. Строки разделяются символом /. Итак, для 6 строк требуется 5/
    MainSyntax: Имя: Точки: Barrees: FretLabels
    Возможны 3 вида точек: По умолчанию — круг. Для квадрата добавьте s после числа, для ромба добавьте d после числа e.г .: C: x / 3d / 2s / 0/1/0

    Чтобы добавить текст в Dots, Barrees или FretLabels, введите:, text so: C: x / 3,3 / 2,2 / 0 / 1,1 / 0 добавляет текст в точки.
    Barrees добавляются с: B и Fretnumber, например: F: / 3/3/2 //: B1 — это стандартный F-аккорд
    Partial Barrees можно ввести, задав начальное и конечное значения Пример: Dm7: x / x / 0 / 2 //: B1 (2-1)
    Вы можете добавить FretLabels на любой лад с помощью: Lfretnumber, текста, например : L1, yourtext
    Когда вы добавляете FretLabel к первому ладу, Nut будет удален. Таким образом, F-аккорд можно превратить в G-аккорд на 3-м ладу, только добавив FretLabel к первому ладу: G: / 3/3/2 //: B1: L1, III
    Больше точек на той же струне (для гамм) можно ввести с помощью — так будет создана сетка с 1 строкой и 3 точками:
    ScaleExample: 1-3-5
    Просто посмотрите на код, сгенерированный Chord-Editor

    2.Edit
    Эта кнопка позволяет вставлять или заменять выбранные аккорды путем редактирования в редакторе аккордов. Редактор поддерживает от 1 до 6 струн и от 1 до 12 ладов.
    Левая кнопка мыши добавит точки.
    Shift + щелчок удалит точки.
    Ctrl + Click изменит стиль точки: черный = круг, серый = квадрат, синий = ромб.
    Диаграмма результатов будет включать только заполненные лады или метки. Итак, если вы хотите показать 12 ладов, но есть только точки до 10-го лада, добавьте текст в 12-й лад, например, пустое место.
    Здесь вы также можете посмотреть автоматически сгенерированный аккордовый код. Код аккорда — это то, что создаст диаграмму. Вы можете отключить автоматический режим и добавить больше строк, если хотите.
    3.Style
    Эта кнопка позволяет вам установить предпочтения для новых хордовых диаграмм и изменить стиль выбранных хордовых диаграмм. (Настройка будет сохранена в пользовательских свойствах документа вашего документа). Для сброса просто удалите это свойство в Файл-> Документ-> Свойства-> Пользовательские свойства)
    Вы можете импортировать стили из выбранных аккордов и применять их к выбранным.Также доступен режим реального времени.
    Если вы хотите использовать музыкальные символы ♯ и ♭ вместо # и b, вы можете установить флажок «использовать ♯, ♭ в текстах».
    Кнопка вверху, называемая «Rebuild selection», предназначена для случаев, когда вы хотите применить другую структуру к уже существующим аккордам, например, минимальное количество показываемых ладов или ориентацию макета.
    4.Export
    Позволяет экспортировать выбранные аккорды в формат SVG или .png. (Или вы можете скопировать и вставить аккорд в Draw и экспортировать оттуда)

    Некоторые подсказки:
    — Для изменения масштаба диаграмм лучше всего использовать кнопку «Стиль».(Вы также можете напрямую изменить размер, перетаскивая углы вручную, а затем исправить размеры текста, импортировав, отредактировав и применив стиль.)
    — Привязка «AS Character» возможна, но не рекомендуется. («AS Character» не позволяет редактировать элементы вручную, как описано ниже 🙂
    — Каждую часть диаграммы также можно редактировать напрямую, введя группу или щелкнув ctrl-кнопкой. Чтобы отредактировать текст, дважды щелкните по нему. Для изменения цвета используйте навигатор. Для перемещения частей используйте клавиши со стрелками на клавиатуре, для небольших перемещений используйте клавиши alt + стрелки.В Windows несколько частей можно выбрать с помощью shift + ctrl-click
    — если вы хотите выбрать или изменить сразу несколько диаграмм аккордов, вы можете выбрать их, дважды щелкнув имя аккорда в навигаторе или выбрав одну диаграмму аккорда в документе.